利用CRISPR/Cas9技术缺失MDV分离株meq基因的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张峰

作者： 张峰;于正浩;兰兴鸽;张艳萍;王永强;高立;高玉龙;李凯;祁小乐;崔红玉;潘青;王笑梅;刘长军

作者机构：

关键词： MDV;CRISPR/Cas9;基因编辑;meq基因

期刊名称： 中国家禽

ISSN： 1004-6364

年卷期： 2019 年 009 期

页码： 26-32

收录情况： 北大核心

摘要： 鸡马立克氏病病毒(MDV)是一种能够引起鸡肿瘤的疱疹病毒,具有严格的细胞结合特性,对其基因组编辑较为困难.研究利用CRISPR/Cas9技术对中国MDV分离株基因组中的meq基因进行缺失.依据中国MDV分离株BS/15株的meq基因序列,设计了8条靶向meq基因的小向导RNA(sgRNA),分别克隆到pX330质粒中,构建表达靶向meq基因sgRNA的质粒pMeqsgRNA.通过pMeq-sgRNA转染、测序分析方法初步评价sgRNA切割效果,选择了两条适合的sgRNA.在鸡胚成纤维细胞(CEF)上同时转染上述筛选的2个pMeq-sgRNA质粒,接种MDV分离株BS/15株,通过PCR检测筛选meq基因缺失克隆株,成功克隆到一株meq基因缺失株.序列分析证明获得的MDV重组毒株确定meq基因序列已被敲除.体外试验证明该MDV重组毒株与亲本毒株在CEF上具有相似的复制能力.研究提供了一种简单、快捷的编辑MDV基因的方法,为MDV功能基因、分子进化和新型基因工程疫苗的研究提供了技术支持.

分类号： S852.65

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