多主棒孢SdhB-H278R突变位点AS-real-time PCR定量检测本系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙炳学

作者： 孙炳学;石延霞;朱发娣;谢学文;柴阿丽;李宝聚

作者机构：

关键词： 黄瓜;多主棒孢;AS-real-time PCR;抗药性;琥珀酸脱氢酶B亚基;啶酰菌胺

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2018 年 51 卷 024 期

页码： 4647-4658

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]建立一种快速、高效、定量检测黄瓜多主棒孢(Corynespora cassiicola)琥珀酸脱氢酶B亚基(SdhB) H278R突变的实时荧光定量PCR(AS-real-time PCR)检测方法,并进行效果验证.[方法]从北京市大兴区采集、分离纯化病原菌,获得24株多主棒孢的单孢菌株,采用菌丝生长速率法测定其对啶酰菌胺的EC50,随机选取4株敏感(S)和8株抗性(R)菌株测其菌丝生长速率、产孢量和致病性.采用引物对Cc-SdhB-F/R测定多主棒孢SdhB基因序列,检测SdhB的碱基变化.基于多主棒孢SdhB的相同核酸序列和SNP位点设计内参引物B-H278R-TY-F/R和特异性引物B-H278R-2F/2R14,建立并优化AS-real-time PCR定量检测体系,并对引物的特异性、熔解曲线和灵敏度进行评价.利用该体系分别检测含有H278R不同突变比例的DNA和孢子悬浮液.[结果]测定的24个菌株中,敏感菌株占66.7%,EC50值为0.057-0.563 μg·mL-1;抗性菌株占33.3%,EC50值为5.395-11.710μg·mL-1.抗性和敏感菌株仅在菌丝生长速率方面存在显著性差异,且菌丝生长速率与EC50之间存在显著负相关.在产孢量和致病性方面不存在显著性差异.测序分析发现抗性菌株均携带SdhB-H278R突变.本研究设计的引物B-H278R-2F和B-H278R-2F2R14特异性强,仅对多主棒孢SdhB-H278R突变菌株的DNA有扩增条带,对其余供试菌株均无条带扩增.普通AS-PCR检测的灵敏度为91 pg·μL-1,而AS-real-time PCR的灵敏度可达9.1 pg·μL-1,灵敏度为普通AS-PCR的10倍.以基因组DNA为标准品,构建的AS-real-time PCR标准曲线△CT值与相对模板浓度的对数有良好的线性关系,相关系数为0.9857,扩增效率为92.59%.熔解曲线吸收峰单一,内参引物B-H278R-TY-F/R和特异性引物B-H278R-2F/2R14分别在87.81℃和91.62℃处出现单一特异性峰.用DNA和孢子悬浮液对标准曲线进行验证,结果表明随着相对模板浓度逐渐降低,该检测体系的准确性逐渐升高且检测下限为5%,同时预期值与试验值呈线性相关(R2=0.9998和R2=0.9922).[结论]建立了一种高效、定量、快速的AS-real-timePCR检测体系用于SdhB-H278R突变位点的检测,可为杀菌剂的抗性治理提供理论依据.

分类号：

  • 相关文献

[1]多主棒孢SdhB-H278R突变位点AS-real-time PCR定量检测体系的建立. 孙炳学,石延霞,朱发娣,谢学文,柴阿丽,李宝聚. 2018

[2]多主棒孢SdhB-H278Y突变位点real-time PCR检测体系的建立与应用. 朱广雪,阎昱韬,孙炳学,周荣佳,岳圆圆,谢学文,柴阿丽,李磊,李宝聚,石延霞. 2023

[3]啶酰菌胺不同抗性类型多主棒孢的生物学特性. 阎昱韬,孙炳学,陈长军,谢学文,柴阿丽,李磊,石延霞,李宝聚. 2020

[4]天津地区黄瓜多主棒孢对啶酰菌胺的敏感性研究. 高苇,杨利娟,王勇,马建芳,刘亚全. 2021

[5]河北省多主棒孢对3种常用杀菌剂的抗性及替代药剂对黄瓜棒孢叶斑病的防治效果. 朱广雪,岳圆圆,朱青艳,温智浩,孙炳学,周荣佳,谢学文,柴阿丽,李磊,范腾飞,李宝聚,石延霞. 2024

[6]江苏省句容市灰霉病菌对啶酰菌胺的抗药性. 肖婷,陈露,张建华,芮东明,许媛,吉沐祥,杨敬辉. 2018

[7]长三角地区果蔬灰霉病病菌对5种杀菌剂的抗药性检测. 卢晓雪,聂国嫒,孙海燕,张金凤,陈怀谷,魏利辉. 2018

[8]黄瓜棒孢叶斑病的防治及抗药性研究进展. 王满意,田芳,赵卫光,边强. 2014

[9]啶酰菌胺对黄瓜灰霉病防治效果的综合评价. 唐明,晋知文,谢学文,柴阿丽,石延霞,李宝聚. 2016

[10]38%唑醚·啶酰菌胺悬浮剂中啶酰菌胺在黄瓜上的残留及消解动态. 洪思慧,张超,曹晓林,王猛强,赵风年,郑鹭飞,王珊珊,佘永新,金茂俊,金芬,邵华,王静. 2017

[11]不同黄瓜品种对黄瓜棒孢叶斑病的抗性鉴定. 高苇,王勇,张春祥. 2016

[12]茄子棒孢叶斑病病原菌鉴定及致病性研究. 高苇,李宝聚,石延霞,谢学文. 2012

[13]黄瓜棒孢叶斑病的Dot-ELISA检测技术研究. 高苇,李宝聚,刘春艳,王勇,石延霞. 2013

[14]啶酰菌胺对油菜菌核病的作用方式及其田间防效. 顾炳朝,朱桂梅,岳绪国,肖婷,潘以楼. 2012

[15]啶酰菌胺对番茄叶霉病菌的毒力及田间防效. 陈宏州,杨敬辉,张文文,庄义庆. 2013

[16]啶酰菌胺对草莓灰霉病菌的毒力测定及田间防效. 杨敬辉,陈宏州,吴琴燕,肖婷,吉沐祥. 2010

[17]啶酰菌胺对水稻纹枯病菌的毒力及田间防效. 陈宏州,杨敬辉,狄华涛,庄义庆. 2013

[18]水稻纹枯病菌对啶酰菌胺的敏感性测定. 陈宏州,狄华涛,吉沐祥,杨敬辉. 2011

[19]油菜菌核病菌对啶酰菌胺的敏感性及对不同杀菌剂敏感性的相关分析. 潘以楼,朱桂梅,郭建,肖婷,顾炳朝. 2012

[20]啶酰菌胺和溴菌腈对家蚕真菌病防治效果研究. 刘文光,刘惠芬,衣葵花,李云芝. 2017

作者其他论文 更多>>

微信小程序