侵染广东连州葫芦的黄瓜绿斑驳花叶病毒的分子特征及致病性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李正刚

作者： 李正刚;农媛;汤亚飞;佘小漫;于琳;蓝国兵;邓铭光;何自福

作者机构：

关键词： 葫芦;黄瓜绿斑驳花叶病毒;分子特征;侵染性克隆;致病性

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2020 年 05 期

页码： 955-964

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是侵染瓜类作物的主要病毒之一,对瓜类产业造成巨大的危害。本研究旨在探明侵染广东省连州市葫芦的CGMMV分离物(CGMMV-GDLZ)分子特征及其在系统进化中的地位,并测定其对黄瓜、葫芦和西瓜的致病性,为CGMMV的防控提供理论依据。【方法】从广东省连州市葫芦种植基地采集2个疑似CGMMV侵染的病样以及1个无症状样品,提取总RNA,根据CGMMV参考序列(GenBank登录号:KX883801)设计引物进行RT-PCR检测,引物序列为F:CCACGAGTTGTTTCCTAATGCTG/R:TTTGCTAGGCGTGATCGGATTGT,退火温度53℃,扩增长度890 bp。将CGMMV全长序列分为前后两段,前半段1—3 511 nt,扩增引物序列为F:AAGTTCATTTCATTTGGAGAGGGTTTTAATTTTTATAA TTAAACAAA/R:AGTTCTGCATTAATTGCTATTTGGTAGGCACAGTGGTAG;后半段3 301—6 423 nt,扩增引物序列为F:GTGCGTGCTACCCCGACTCCAATAGGTTTGATTGCCCGTG/R:GGTGGAGATGCCATGCCGACCCTGGGCCCCTACCCGGGGAAAGG。将前后两段PCR产物通过同源重组的方法克隆到pCB301双元载体上,测序得到CGMMV-GDLZ分离物全长序列。利用CGMMV-GDLZ分离物全长序列在NCBI中进行Blast分析,然后通过MEGA7软件对CGMMV-GDLZ以及其他已经报道的CGMMV分离物进行系统进化树分析。将构建好的pCB301-CGMMV侵染性克隆注射接种本生烟验证其侵染性,然后再注射接种黄瓜、葫芦和西瓜的子叶,测定CGMMV-GDLZ分离物的致病性。【结果】RT-PCR结果证实,广东省连州市葫芦病样感染了CGMMV。CGMMV-GDLZ分离物全长序列为6 423 nt,编码4个蛋白,分别为129K复制酶(61—3 495 nt)、186K复制相关蛋白(61—5 007 nt)、运动蛋白MP(4 994—5 788 nt)和外壳蛋白CP(5 763—6 248 nt)。CGMMV-GDLZ核苷酸序列与CGMMV-eWT分离物(GenBank登录号:KY753928)同源性最高,为99.97%。系统进化树分析结果显示,CGMMV-GDLZ分离物与日本、韩国等东亚CGMMV分离物同属Group 1,在遗传距离上与山东、浙江和河南的CGMMV分离物最接近。pCB301-CGMMV侵染性克隆可以系统侵染本生烟,造成本生烟上部叶片出现皱缩、斑驳、凸起等症状,RT-PCR和Western blot进一步确认了侵染性克隆的侵染性。注射接种CGMMV-GDLZ分离物后15 dpi,葫芦和西瓜即可产生斑驳、花叶、突起、生长迟缓等症状,24 dpi时症状更明显。而15 dpi时,CGMMV-GDLZ分离物在黄瓜上的症状不明显,与未接种对照植株几乎没有区别;将植株从控温接种室移入网室中,30 dpi时,黄瓜植株上部叶片开始出现斑驳和花叶,40 dpi时,症状已经非常明显。RT-PCR和Western blot检测进一步确认了上述结果。【结论】侵染广东省连州市葫芦的CGMMV-GDLZ分离物与山东、浙江和河南的CGMMV分离物很可能具有相同的传染源;CGMMV-GDLZ分离物可以侵染本生烟、黄瓜、葫芦和西瓜等作物,但对这些作物的致病性存在差异。

分类号： S432.41

  • 相关文献

[1]侵染萝卜的油菜花叶病毒广东分离物分子特征及其致病性分析. 李正刚,汤亚飞,佘小漫,于琳,蓝国兵,何自福. 2022

[2]我国斯里兰卡木薯花叶病毒的分子特征及致病性分析. 王国芬,李超萍,时涛,吴会杰,蔡吉苗,李博勋,陆翠梅,黄贵修. 2024

[3]农杆菌介导的黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染性克隆的构建及其相关的突变. 刘莉铭,彭斌,古勤生. 2015

[4]基于基因组序列分析的烟草轻绿花叶病毒江苏辣椒分离物侵染性克隆构建. 高晓晓,涂丽琴,杨柳,刘亚楠,高丹娜,孙枫,李硕,章松柏,季英华. 2023

[5]侵染海南雪茄烟的中国黄花稔曲叶病毒侵染性克隆的构建. 李萌,夏长剑,杨金广,王天玉,吕洪坤,吴会杰. 2019

[6]木尔坦棉花曲叶病毒及其伴随的β卫星分子复合侵染引起广东棉花曲叶病. 汤亚飞,何自福,杜振国,佘小漫,蓝国兵. 2015

[7]木尔坦棉花曲叶病毒V2蛋白N端保守脯氨酸对病毒致病性的影响. 尚鹏祥,张洁,张琦,郑信诗,李景远,庄军,吴祖建. 2023

[8]广东省番茄白尖曲叶病病原鉴定及其致病性分析. 王愿,都梦丹,李正刚,佘小漫,于琳,蓝国兵,丁善文,何自福,汤亚飞. 2024

[9]番茄黄化曲叶病毒北京分离物侵染性克隆的构建与其致病性. 龚攀,赵斯文,周雪平,李方方. 2022

[10]中国葡萄类病毒基因多样性分析及其新种的发现. 姜冬梅,郭瑞,彭山,吴祖建. 2009

[11]葫芦种质资源遗传多样性分析. 王永行,白立华,单飞彪,杜瑞霞,郭宏强,杨钦方,刘春晖. 2018

[12]响应面法优化葫芦多糖提取条件. 阿得力江·吾斯曼,买买提·艾孜子,阿依姑丽·买买提明,吐尔洪·努尔,赛福丁·阿不拉. 2016

[13]河套地区籽用葫芦新品种的选育技术. 白立华,杜瑞霞,闫文芝,赵春芝,单飞彪,王永行,杨钦方,刘春晖,白纯烨. 2019

[14]葫芦小孢子发育时期与花器形态相关性. 胡雪丹,张曼,侯茜,徐锦华,刘广,姚协丰,李苹芳,陈学好,羊杏平. 2015

[15]育苗基质对葫芦幼苗的影响. 寿伟松,徐志豪,华卿,周胜军,董文其,陈丽萍,戴丹丽. 2005

[16]葫芦抗白粉病鉴定初报. 雷娟利,董文其,寿伟松,徐志豪. 2007

[17]葫芦自交系苗期白粉病抗性鉴定. 耿丽华,宋顺华,徐秀兰,吴萍,宫国义. 2015

[18]不同影响因子诱导葫芦花药愈伤组织. 胡雪丹,张曼,侯茜,徐锦华,刘广,姚协丰,李苹芳,任润生,陈学好,羊杏平. 2016

[19]西瓜砧木用葫芦新品种‘皖砧5号’. 王朋成,张建,严从生,江海坤,王艳,田红梅,王明霞,贾利,张其安. 2017

[20]黄瓜绿斑驳花叶病毒的生物学与分子检测鉴定. 李海明,吴祖建,陈启建,沈建国. 2011

作者其他论文 更多>>

微信小程序