基于双抗夹心的Cry1B毒素蛋白质TRFIA检测方法的建立与评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐重新

作者： 徐重新;陈莎莎;张霄;刘媛;张存政;黄鹰;刘贤进

作者机构：

关键词： 苏云金芽孢杆菌;时间分辨免疫分析;单链抗体;多克隆抗体

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2013 年 29 卷 001 期

页码： 184-188

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立检测Cry1B毒素蛋白质的双抗夹心时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法,利用稀土元素Eu3+作为示踪剂,以可溶性表达的抗Cry1B毒素蛋白质单链抗体(scFv)作为捕获抗体,以免疫兔血清获得的抗Cry1B毒素蛋白质多克隆抗体为检测抗体,建立检测Cry1B抗原的TRFIA技术,并对其进行方法学的综合评价.通过正交试验,获得的最佳单链抗体(Capture antibody)、多克隆抗体(Detection antibody)、Eu3+标记的二抗(Tracer antibody)浓度分别是2.500μg/ml、2.000 μg/ml、1.000μg/ml.标准检测曲线灵敏度为0.170 ng/ml,线性测量范围为1.000~ 800.000 ng/ml.抗原类似物间无交叉反应.Cry1B毒蛋白质在大米中添加回收的批内变异系数为3.8%~6.6%、平均回收率为80.5%~ 84.8%,批间变异系数为2.2% ~8.5%、平均回收率为84.1% ~ 88.4%.表明本试验建立的双抗夹心Cry1B-TRFIA检测范围宽,特异性强,重复性和稳定性好.

分类号： Q78

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