双抗夹心ELISA检测兔出血症病毒抗原方法的建立及初步评估

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郭慧敏

作者： 郭慧敏;谭永贵;缪秋红;朱杰;刘腾;陈宗艳;李传峰;刘光清

作者机构：

关键词： 兔出血症病毒;单克隆抗体;双抗夹心ELISA

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2016 年 24 卷 02 期

页码： 20-24

摘要： 为建立一种快速、特异性强的用于检测兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)抗原的双抗夹心ELISA方法,本研究通过抗体配对实验,确定以抗兔出血症病毒结构蛋白VP60单克隆抗体9H9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的9H9为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法。通过优化,确定最佳条件为:0.5μg/m L稀释后的9H9作为捕获抗体,底物显色液37℃包被2 h 4℃过夜,1%明胶溶液37℃封闭2 h,用含10%胎牛血清的PBST按5μg/m L稀释后的辣根过氧化物酶标记的9H9作为检测抗体,37℃作用15 min。建立的ELISA方法与杯状病毒科其他病毒无交叉反应,应用本方法和RT-PCR方法对85份兔肝脏样品进行检测,证明双抗夹心ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,有望作为临床快速检测的一种简便方法。

分类号： S852.65

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