重组人胰岛素在毕赤氏酵母中的分泌表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 何尧声

作者： 何尧声;沈文涛;陈春宝;王明钦;周鹏

作者机构：

关键词： 重组人胰岛素;毕赤酵母;分泌表达

期刊名称： 药物生物技术

ISSN： 1005-8915

年卷期： 2009 年 02 期

页码： 108-112

收录情况： CSCD

摘要： 利用套叠PCR技术合成重组人胰岛素基因,并在A链和B链之间加入Kex2酶切位点。将合成的重组人胰岛素基因以正确的阅读框插入到组成型分泌表达载体pGAPZα-A的α-factor信号肽序列的下游,构建成pGAPZα-A/Insulin重组分泌表达载体。表达载体用BlnI线性化处理后电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,构建成分泌型表达Insulin的工程菌。SDS-PAGE和Native-PAGE的分析表明:蛋白在分泌表达过程中,加入Insu-lin的A链(2.4k)和B链(3.4k)之间的Kex2酶切位点发挥了作用,Kex2蛋白酶将A链和B链切开,在α-factor信号肽的作用下通过分泌途径将A链和B链分泌到胞外,同时A链和B链又以二硫键形成了高级结构。Western Blot结果表明:重组蛋白能够与鼠抗人Insulin抗体发生特异性反应,具有与天然Insulin相同的免疫原性。

分类号： Q78

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