中国白兔白介素-15基因的克隆、序列分析及其在E.coli中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孟庆玲

作者： 孟庆玲;才学鹏;乔军;骆学农;景志忠

作者机构：

关键词： 兔白介素-15基因;克隆;序列分析;大肠杆菌表达

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2008 年 28 卷 05 期

页码： 518-522

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以RT-PCR技术对用ConA刺激的中国白兔外周血淋巴细胞(PMBCr)进行扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定,并与不同物种的IL-15基因进行序列比较。结果IL-15基因全长489 bp,编码162个氨基酸,其中前29个氨基酸残基构成信号肽序列。与不同物种IL-15基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异。在推导的中国白兔IL-15氨基酸序列中,在108~110、119~121、127~129和143~146位存在4个潜在的N-联糖基化位点,同时存在6个Cys残基。将pTIL-15双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中构建了重组质粒pETIL-15,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行了诱导。结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量为20 500的重组目的蛋白。经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的13.6%。

分类号： S852.4

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