A型塞内卡病毒VP1蛋白的抗体制备及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李佳乐

作者： 李佳乐;郭子强;罗梦;唐银保;帅文娜;李丽薇;周艳君;姜一峰;童武;童光志;丛雁方;高飞

作者机构：

关键词： A型塞内卡病毒;猪繁殖与呼吸综合征病毒;VP1蛋白;多克隆抗体;原核表达;活病毒载体

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年 54 卷 012 期

页码： 1643-1650

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在制备A型塞内卡病毒（SVA）VP1的多克隆抗体，并用重组病毒rPRRSV-SVA-VP1和真核质粒pcDNA3.1-VP1-Myc进行验证。首先对VP1序列进行优化分析，合成序列后插入克隆载体中，构建原核表达质粒p ET-VP1，并转化至感受态E.coli BL21(DE3)细胞，经IPTG诱导后，获得重组VP1蛋白。将该重组蛋白免疫新西兰大白兔，制备获得重组VP1蛋白的多克隆抗体。此外，利用本团队构建并保存的能够稳定表达SVA VP1蛋白的重组病毒rPRRSV-SVA-VP1感染Marc-145细胞后，用上述制备的VP1多克隆抗体进行验证。结果显示，pET-VP1在大肠杆菌中于37℃经1 mmol/L的IPTG诱导12 h，成功表达约37 ku目的蛋白；Western-blot结果显示，制备的多克隆抗体能特异性识别VP1蛋白；间接免疫荧光试验表明，制备的多克隆抗体能够特异性识别rPRRSV-SVA-VP1感染Marc-145细胞后表达的VP1蛋白和真核质粒pcDNA3.1-VP1-Myc转染至293T细胞后表达的VP1蛋白。上述结果表明，本研究制备的VP1多克隆抗体具有良好的反应性和特异性，为SVA血清学检测方法的建立以及SVA VP1蛋白的生物学功能的研究奠定了基础。

分类号： S852.65

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