TaqMan荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立与初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘邓

作者： 刘邓;袁秀芳;冉多良;徐丽华;牛登元;王朝文;王一成

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒;荧光定量RT-PCR;TaqMan荧光探针

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2010 年 18 卷 01 期

页码： 28-34

摘要： 根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒N基因序列,设计了一对特异性引物和探针,扩增长度为186bp的片段。以克隆N基因的质粒作为阳性标准品,建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法在10~8～10~1 copies/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10 copies/μL的质粒DNA,以猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为模板时,均检测不到荧光信号,而重复性实验中其变异系数均小于2%,表明此方法具有很好的特异性和重复性。应用此方法对采集的60份临床样品进行检测,其阳性检出率为92%,而用常规RT-PCR方法进行检测,阳性检出率仅为80%。表明荧光定量RT-PCR方法的敏感性明显高于常规PCR检测方法。

分类号： S858.282.659.6

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