原核表达番木瓜环斑病毒NIa-Pro及其双重酶活鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 韩杰

作者： 韩杰;郑继平;言普;庹德财;黎小瑛;沈文涛;周鹏

作者机构：

关键词： NIa-Pro;番木瓜环斑病毒;原核表达;蛋白酶;DNA酶

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2016 年 37 卷 04 期

页码： 722-727

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)编码的核内涵体蛋白a蛋白酶(Nuclear inclusion body a proteinase,NIa-Pro)是一种多功能病毒非结构蛋白,在病毒侵染宿主及病毒与宿主互作中起着重要作用。本研究利用以麦芽糖结合蛋白(MBP)为融合表达框架的原核表达系统构建了表达NIa-Pro的重组载体pMAL-c5xNP,并转化大肠杆菌,经IPTG诱导和Ni~(2+)-NTA-琼脂糖亲和层析纯化获得了可溶的重组融合蛋白MBP-NIa(N端和C端分别融合MBP和His标签),然后利用蛋白酶Factor Xa切去重组融合蛋白中的MBP,再通过直链淀粉树脂亲和层析纯化获得了可溶的重组蛋白NIa-Pro。活性检测结果表明,重组蛋白PRSV-NIa-Pro具有非特异的双链DNA酶和特异的蛋白酶双重活性。

分类号： S436.67

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