新城疫病毒F_(48)E_9株和La Sota株F基因在Bac-to-Bac昆虫杆状病毒系统中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 袁萍

作者： 袁萍;闫丽辉;冉多良;刘培欣;闻晓波;曹殿军

作者机构：

关键词： 新城疫病毒;F基因;重组杆状病毒;蛋白表达

期刊名称： 新疆农业大学学报

ISSN： 1007-8614

年卷期： 2006 年 29 卷 02 期

页码： 5-8

摘要： 将新城疫病毒(F48E9株和La Sota株)F基因插入至杆状病毒转移载体pFastBacTMHT A中,分别构建重组质粒pFastBacHT-F48F,pFastBacHT-LaF,然后转化E.coliDH5α,以LB/AMP±平板筛选阳性重组子并测序。测序正确后转化至E.coliDH10Bac感受态细胞中,经抗性培养和蓝白斑筛选,筛选出白色菌落后,提取重组Bacmids(分别命名为rBacmid-F48F和rBacmid-LaF),经PCR鉴定正确后,将阳性重组Bacmids转染Sf9昆虫细胞。在昆虫细胞内,重组Bacmid经复制,表达,装配,形成重组杆状病毒,经SDS-PAGE和Western-blot分析,证实NDV F48E9株和La Sota株的F蛋白均获得正确表达,所表达的重组F蛋白分子量约56 kD,证明在昆虫细胞内表达并部分糖基化,具有良好的免疫原性,为表达F基因并建立适合国内应用的ELISA诊断方法奠定了基础。

分类号： Q786`S852.65

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