结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 蔡珠明

作者： 蔡珠明;党光辉;臧鑫鑫;邵明珠;唐阳阳;鹿萍;崔莹莹;崔子寅;刘思国

作者机构：

关键词： 结核分枝杆菌复合群;副结核分枝杆菌;禽分枝杆菌禽亚种;多重Taq Man荧光定量PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2023 年 001 期

页码： 51-59

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 结核分枝杆菌复合群（MTBC）、包括结核分枝杆菌（MTB）、牛分枝杆菌（MB）、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等；非结核分枝杆菌（NTM）中禽分枝杆菌（MA）是自然界常见的动物致病菌，包含4个亚种，分别为禽分枝杆菌禽亚种（MAA）、禽分枝杆菌人/猪亚种（MAH）、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌（MAP）和禽分枝杆菌森林土壤亚种（MAS）。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法，本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针，通过优化各反应条件，建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示，该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性，对其他畜禽病原菌，包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性，特异性较强。敏感性试验结果显示，该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL，敏感性较高；重复性试验结果显示，批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%，重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染（MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0×10~3cfu/mL～1.0×10~0cfu/mL）的27份牛抗凝血和12份牛淋巴结组织样品，确定该方法对3种菌的检测限，结果显示该方法对3种菌的检测限均为1.0 cfu/mL～10.0 cfu/mL。将浓度为1.0×10~6cfu/mL的MB、MAP和MAA菌液分别单一、两两混合、三种菌混合感染BALB/c小鼠，5 d后，剖杀各组小鼠并取各组织及血液样品，同时采用该方法、常规单一PCR及细菌分离培养方法检测，比较三者的检测结果。结果显示，多重荧光定量PCR方法对不同感染组小鼠的各组织样品检出率为98.1%（212/216），常规单一PCR方法的检出率为81.5%（176/216），细菌分离培养的检出率为52.8%（114/216），多重荧光定量PCR与常规单一PCR的阳性符合率均为100.0%（176/176），与细菌分离培养鉴定结果的阳性符合率均为100.0%（114/114）。本研究首次建立了能够同时检测MTBC、MAP和MAA的Taq Man多重荧光定量PCR方法，其特异性强、敏感性高、重复性及稳定性好，检测性能强，可以用于临床各种样品的检测，为这3种病原的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。

分类号： S852.618

  • 相关文献

[1]一例肉牛副结核分枝杆菌感染的诊断. 侯美如,张艳,冯万宇,周庆民,史同瑞,杨淑萍. 2019

[2]副结核分枝杆菌MAP0862蛋白的重组表达及抗原性分析. 李丹丹,张体银,王绥家,晁哲,高慎阳. 2019

[3]表面展示副结核分枝杆菌重组蛋白rMAP62-54c的大肠杆菌载体疫苗的构建及其免疫效果评价. 丁仕豪,周薇,许秋,张卓,陆瑶,刘思国,于申业. 2020

[4]绵羊副结核分枝杆菌的分离与分子分型. 洪都孜·波拉提,魏玉荣,孟肖潇,杨学云,古努尔·吐尔逊,李建军,吴建勇. 2021

[5]副结核分枝杆菌PanCD基因缺失株的构建及毒力评价. 姜艳艳,鹿萍,崔宁,陈凡若,崔莹莹,党光辉,刘思国. 2024

[6]一起牛病毒性腹泻病毒、副结核分枝杆菌和弯曲杆菌共感染的诊治. 陈亮,沈思思,冯万宇,张蕾,兰世捷,苗艳,李丹,刘雪松,江波涛,钟鹏,于辰龙. 2024

[7]副结核分枝杆菌免疫原蛋白的筛选及免疫保护效果评价. 陈凡若,张嘉俊,鹿萍,崔宁,崔莹莹,崔子寅,党光辉,刘思国. 2024

[8]牛副结核分枝杆菌多组分亚单位疫苗的初步研究. 程玉笛,党光辉,李鹤,李哲,刘虹秀,宋宁宁,刘思国. 2018

[9]新疆北疆地区某规模化奶牛场奶牛副结核病的检测与分析. 张丽媛,吴桐忠,马雪,操义恒,王巧梅,王子杰,李劼,周霞,黄新,何延华,韩猛立,张星星,钟发刚. 2022

[10]一起牛病毒性腹泻病毒、副结核分枝杆菌和弯曲杆菌混合感染的诊治报告. 陈亮,沈思思,冯万宇,张蕾,兰世捷,苗艳,李丹,刘雪松,江波涛,钟鹏,于辰龙. 2024

[11]奶牛副结核病例的临床诊断. 赵俊亮,吴建勇,葛建军,王登峰. 2019

[12]牛副结核分枝杆菌多组分亚单位疫苗的初步研究. 程玉笛,党光辉,李鹤,李哲,刘虹秀,宋宁宁,刘思国. 2018

[13]奶牛副结核病流行牛场的处置方案分析. 吴建勇,杨学云,李建军,古努尔·吐尔逊,孟肖潇,洪都孜·波拉提,金映红,王登峰. 2020

[14]新疆奶牛副结核分枝杆菌的分离鉴定. 吴建勇,李建军,王登峰,杨学云,王蒴,刘丽娅,季新成,王治才. 2016

[15]副结核分支杆菌MAP0862蛋白的表达及临床应用. 解晓莉,孙阳阳,程凯慧,楚会萌,张亮,王基隆,杨美,杨宏军. 2019

[16]副结核分枝杆菌MAP1068胞外蛋白酶的特性研究. 王忠星,党光辉,刘虹秀,臧鑫鑫,崔莹莹,崔子寅,宋宁宁,陈利苹,刘思国. 2019

[17]黑龙江某规模化牛场副结核分枝杆菌的分离与鉴定. 蔡珠明,党光辉,臧鑫鑫,邵明珠,唐阳阳,崔子寅,宋宁宁,刘思国. 2020

[18]牛副结核分枝杆菌的分离及鉴定. 刘虹秀,程玉笛,党光辉,李田田,李鹤,崔子寅,宋宁宁,陈利苹,刘思国. 2018

[19]副结核分枝杆菌胞外GDSL脂肪酶MAP＿2739的酶学特性研究. 王建国,陈凡若,鹿萍,臧鑫鑫,党光辉,姜艳艳,崔宁,冯婷婷,张嘉俊,王慧,崔莹莹,崔子寅,刘思国. 2023

作者其他论文 更多>>

微信小程序