鸡树突状细胞的间接免疫荧光制片方法比较

文献类型： 中文期刊

第一作者： 何静怡

作者： 何静怡;舒鼎铭;林楚晓;李莹;王艳;罗成龙

作者机构：

关键词： 鸡;树突状细胞;免疫荧光;激光共聚焦扫描;细胞爬片法;细胞滴片法

期刊名称： 广东农业科学

ISSN：

年卷期： 2020 年 010 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]比较分析骨髓源鸡树突状细胞两种间接免疫荧光制片方法(细胞爬片法和细胞滴片法),以进一步提高研究树突状细胞生物学的实验技术和方法.[方法]以鸡胚为试验素材,分离原代细胞,定向诱导分化获得未成熟的树突状细胞,并利用新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)lasota株激活细胞.监测内源性蛋白ROBO2(Roundabout)和外源性蛋白NDV表达情况,鸡源NDV抗体与小鼠源ROBO2单克隆抗体混合孵育,结合荧光素二抗进行标记.应用激光共聚焦扫描显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)对树突状细胞进行荧光成像并捕抓图像数据,多方位分析对比细胞爬片法和细胞滴片法.[结果]细胞滴片制作过程繁琐且耗时长;细胞爬片则操作简单可缩短实验时间.两种制片方法的NDV和ROBO2单阳性和阴性分别存在极显著差异,双阳性存在荧光反应性显著差异.[结论]滴片法蛋白免疫反应性更优,适合标记目的蛋白进行亚细胞定位.爬片法始终维持细胞形态学特征和保持蛋白特性,利于两抗体荧光重叠,综合显色性更强.

分类号： S831

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