水稻干尖线虫海藻糖6-磷酸合成酶基因双链RNA细菌表达体系构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 崔苗苗

作者： 崔苗苗;杨行洲;宋海艳;魏利辉;顾爱国;乐秀虎;李东霞;冯辉

作者机构：

关键词： 水稻干尖线虫;海藻糖-6磷酸合成酶基因;双链RNA;RNA干扰

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2025 年 41 卷 005 期

页码： 867-874

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 外源双链RNA(dsRNA)可通过RNA干扰(RNAi)影响植物线虫的基因表达，达到杀虫防病的目的。利用细菌表达系统进行dsRNA制备，生产效率高、成本低，是dsRNA规模化制备的优选策略。为探索基于RNAi技术的细菌表达dsRNA在水稻干尖线虫(Aphelechoides besseyi)防治中的作用，本研究以水稻干尖线虫海藻糖6-磷酸合成酶基因AbTPS1和AbTPS2为靶标基因，设计构建细菌表达双链RNA(dsAbTPS1、dsAbTPS2)载体并转化大肠杆菌HT115(DE3),优化dsRNA诱导表达条件和提取方法，并利用荧光定量PCR测定细菌表达的dsRNA对靶标基因的沉默效率，评估其对水稻干尖线虫的防治效果。结果表明，当异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度为0.5 mmol/L、诱导时间为6 h,本研究构建的携带AbTPS-L4440表达载体HT115菌株的dsRNA产量达到最大。利用Trizol法和甲酰胺法从表达菌株中提取的dsRNA产量显著高于乙醇-氯化钠法。用dsAbTPS1和dsAbTPS2处理水稻干尖线虫后，靶基因AbTPS1和AbTPS2表达水平下调，在4℃低温、40℃高温及脱水干燥环境中水稻干尖线虫存活率均显著低于M9缓冲液处理和dsGFP处理。本研究成功构建了水稻干尖线虫AbTPS1、AbTPS2基因的dsRNA细菌表达体系，获得的dsRNA具有明显的RNAi效应，为利用RNA农药防治水稻干尖线虫提供了技术支撑。

分类号： S435.111.48

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