绵羊肺炎支原体膜蛋白p74基因的克隆、分子特征及反应原性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 卢海亭

作者： 卢海亭;孟庆玲;乔军;彭叶龙;陈诚;田路路;贡莎莎;才学鹏;陈创夫

作者机构：

关键词： 绵羊肺炎支原体;p74基因;克隆;序列分析;原核表达;反应原性

期刊名称： 西南农业学报

ISSN： 1001-4829

年卷期： 2017 年 05 期

页码： 1222-1228

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【方法】利用PCR方法对绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)新疆分离株MO-XJ p74基因进行扩增、克隆及测序,分析其分子特征。将P74蛋白抗原集中区编码序列亚克隆至表达载体p ET-32a(+),构建重组表达载体p ET-32a(+)-p74C,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达。【结果】MO-XJ p74基因全长2016 bp,编码671个氨基酸;对编码的氨基酸序列分析发现,该蛋白不含信号肽序列,9~31位氨基酸序列含有1个跨膜区,有16个N-糖基化位点、7个N-酰基化位点、17个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点及5个蛋白激酶C磷酸化位点。同源性分析显示MO-XJ P74蛋白氨基酸序列与标准株MO-SC01氨基酸序列同源率为86.5%,其羧基端为P74蛋白抗原集中区。SDS-PAGE检测结果显示,表达的P74蛋白抗原表位集中区片段对分子质量约为35.5 k Da,与理论值相符;Western blot分析表明重组P74蛋白具有较强的反应原性。【结论】本研究为进一步筛选MO亚单位疫苗及血清学诊断的候选抗原奠定了前期基础。

分类号： S852

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