动物用质粒DNA内毒素去除方法的建立及其质量检验

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张泉

作者： 张泉;袁燕;袁维峰;孙怀昌;朱鸿飞

作者机构：

关键词： TritonX-114;内毒素;转染效率;表达;安全性

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2009 年 29 卷 01 期

页码： 63-66+96

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 用自行改进设计的TritonX-114方法去除动物用重组质粒DNA中的内毒素,鲎试剂检测方法确定每毫克质粒DNA中内毒素的含量为50 EU。将3种不同方法制备的重组质粒pEGFPN1包裹后转染COS-7、MDCK和Marc145细胞,结果表明,经TritonX-114去除内毒素后的质粒DNA(A)与无热源质粒提取试剂盒制备的质粒DNA(B)的转染效率相当,比未经内毒素去除的质粒DNA(C)的转染效率高。将上述3种方法制备的pcDNAlacZ经PEI包裹后尾静脉注射小鼠,注射后每隔2 d扑杀小鼠,取其心、肝、脾、肺和肾组织,定量检测β-半乳糖苷酶的表达和持续时间,结果显示报告基因仅在小鼠的心、脾和肝组织中表达至第8天,A与B的表达水平接近,且明显高于C制备的pcDNALacZ的表达水平,提示经TritonX-114去除内毒素后的质粒DNA可提高转染效率和表达水平。多种动物体内注射重组质粒后,无体温升高等异常临床表征,进一步说明了使用经TritonX-114去除内毒素的质粒DNA具备良好的安全性。

分类号： S852.5

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