猪圆环病毒2型Cap基因的克隆与原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨克礼

作者： 杨克礼;时代;段正赢;田永祥;周丹娜;郭锐;刘泽文;袁芳艳;刘威;孟丽

作者机构：

关键词： 猪圆环病毒2型;Cap基因;克隆;原核表达

期刊名称： 江西农业学报

ISSN： 1001-8581

年卷期： 2017 年 29 卷 01 期

页码： 96-101

摘要： 利用PCV2鄂州株的基因序列设计特异性引物,分别在上、下游引物中加入Sac I和Hind III酶切位点,扩增出PCV2鄂州株的ORF2基因;将该片段克隆至p ET-28a原核表达载体,经PCR、酶切鉴定,成功构建了阳性重组表达质粒p ET-ORF2。将其转入大肠杆菌Rosetta中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析确定重组蛋白大小为34.5 k D,主要以包涵体的形式表达。优化后确定最佳诱导条件为:37℃,至OD值0.4~0.6时加入终浓度为1 mmol/L的IPTG,诱导5 h。表达产物经His-tag镍柱纯化后进行Western-blot分析,结果表明表达的重组蛋白能够与PCV2标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。

分类号： S852.651

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