低纤维素酶背景里氏木霉菌株的构建和应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘杜娟

作者： 刘杜娟;黄火清;苏小运

作者机构：

关键词： 里氏木霉;CRISPR/Cas9;RNAi;纤维素酶;CBH1;EG2

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2020 年 22 卷 012 期

页码： 50-57

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 丝状真菌里氏木霉(Trichoderma reesei)产生的纤维素酶主要包括纤维二糖水解酶和内切葡聚糖酶.在使用里氏木霉表达外源基因时,它们会形成较高的纤维素酶背景,而且其表达还可能会导致对细胞转录、翻译和分泌等相关资源的占用.应用CRISPR/Cas9技术,在体外组装Cas9/gRNA复合物并转化里氏木霉以定点敲除主要的纤维二糖水解酶cbh1基因,同时结合RNAi干扰技术来沉默主要的内切葡聚糖酶eg2基因,以期一步构建里氏木霉低纤维素酶背景的表达系统.获得了一株纤维素酶表达显著下降的11号转化子SUS6.该转化子中,cbh1的表达完全消失,而eg2基因的表达水平较出发菌株SUS5降低了98%.以该转化子为宿主表达外源基因NfBgl3A,两个代表性转化子的β-葡萄糖苷酶酶活最高分别为172.4和79.3 U·mE-1,远高于以出发菌株(高纤维素酶背景)为宿主表达β-葡萄糖苷酶酶活(两个代表转化子分别为11.6和31.9 U·mL-1).因此,构建低纤维素酶背景的菌株作为表达宿主,还可明显的提高某些异源基因的表达水平.

分类号： Q78

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