利用RNAi技术沉默小菜蛾类钙粘蛋白基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨中侠

作者： 吴青君;王少丽;文礼章;徐宝云;张杰;张友军

作者机构：

关键词： 小菜蛾;苏云金芽胞杆菌;类钙粘蛋白;RNA干扰;基因沉默

期刊名称： 昆虫学报

ISSN： 0454-6296

年卷期： 2009 年 52 卷 08 期

页码： 10-15

收录情况： 北大核心

摘要： RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种调控基因表达的方法,其通过体外合成一段与内源靶基因同源的双链RNA(dsRNA)或siRNA,导入生物体内,使内源靶基因中同源mRNA降解,从而达到阻抑基因表达的目的。类钙粘蛋白(cadherin-likeprotein)是位于昆虫中肠刷状缘膜囊(brush border membrane vesicles,BBMV)上与钙粘蛋白(cadherin)结构相似的物质,是多种昆虫体内Bt杀虫蛋白的受体。本研究利用基因特异引物通过RT-PCR扩增了小菜蛾类钙粘蛋白基因的2个片段(CAD1和CAD2),合成相对应的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA);并将dsRNA通过显微注射导入小菜蛾3龄幼虫体内,测定了不同靶位点、不同剂量、不同检测时间对目的基因mRNA表达量的影响。结果表明:将70nLCAD1对应的dsRNA注射到幼虫体内48h后,基因表达量显著下降,72h后恢复。免疫印迹检测结果表明,类钙粘蛋白在注射dsRNA48h后幼虫BBMV中的含量明显下降。本实验成功实现了小菜蛾类钙粘蛋白基因的沉默,该体系的成功建立为利用RNAi技术分析小菜蛾及其他鳞翅目昆虫基因的功能提供了参考。

分类号： S433.4

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