高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒strand-specific 荧光定量RT-PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨莘

作者： 杨莘;周艳君;单同领;姜一峰;童武;童光志

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;strand-specific荧光定量RT-PCR;不同链RNA

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2014 年 36 卷 11 期

页码： 872-876

收录情况： CSCD

摘要： 为了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制和转录机制,准确定量其在复制过程中基因组不同类型RNA (vRNA和cRNA)的含量,本研究根据PRRSV基因组Nspl2基因设计含有链特异性标签的特异性引物,建立了一种针对病毒基因组不同链RNA的strand-specific荧光定量RT-PCR方法。结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线在10~1拷贝/μL?10~7拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,对vRNA和cRNA的检测下限为7.40拷贝/μL和6.52拷贝/μL,能够特异性的区分病毒复制过程中产生的vRNA链和cRNA链,具有很高的特异性、灵敏性和重复性。HP-PRRSV感染MARC-145细胞后不同时间段检测vRNA和cRNA含量显示,病毒不同链RNA含量在感染过程中持续增加,vRNA和cRNA含量在感染后24 h约为7.0×l0~7拷贝/μL和7.2×10~6拷贝/μL。本研究建立的方法可以用于区分和定量PRRSV在复制过程中产生的不同链RNA,为研究病毒的复制和致病机理提供了一种有效的检测手段。

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