共表达MEL和Ec-cLYZ重组表达质粒的构建及其重组蛋白的抑菌效果评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈婷

作者： 陈婷;何敬文;赵微;扈立伟;任君;刘青;顾天越;包利霞;金天明

作者机构：

关键词： 蜂毒肽;c型溶菌酶;抑菌;毕赤酵母;共表达

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2023 年 009 期

页码： 1-5,12,127

收录情况： 北大核心

摘要： 为了表达一种高效低毒的广谱抑菌蛋白，试验通过T2A连接肽连接蜂毒肽（MEL）与斜带石斑鱼c型溶菌酶（Ec-cLYZ）基因，并克隆至pPICZαA质粒上构建重组表达质粒；将鉴定正确的重组表达质粒用限制性内切酶SacⅠ线性化后电转化至毕赤酵母表达菌株GS115感受态细胞中，构建毕赤酵母表达菌株；利用0.5%甲醇诱导表达，收集上清液进行冻干浓缩并纯化，采用Western-blot法检测重组蛋白的表达情况，BCA蛋白浓度测定试剂盒测定重组蛋白浓度，试管二倍稀释法分别检测不同浓度重组蛋白对兔红细胞的溶血活性，牛津杯法评价重组蛋白的抑菌效果。结果表明：成功构建出重组表达质粒pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL、pPICZαA-Ec-cLYZ和pPICZαA-MEL及毕赤酵母表达菌株GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL、GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ和GS115/pPICZαA-MEL;经甲醇诱导，GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL表达出分子质量为16.5,3.4 ku的重组蛋白，GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ表达出分子质量为16.5 ku的重组蛋白，GS115/pPICZαA-MEL表达出分子质量为3.4 ku的重组蛋白；上清液中重组蛋白Ec-cLYZ-MEL、Ec-cLYZ、MEL的浓度分别为35.49,28.73,27.31 mg/L;重组蛋白Ec-cLYZ-MEL、Ec-cLYZ、MEL在浓度为150 mg/L时对兔红细胞的溶血率分别为2.3%、2.9%、79.0%;停乳链球菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL高度敏感，表皮葡萄球菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL中度敏感，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL低度敏感，且重组蛋白Ec-cLYZ-MEL对测试菌株的抑菌效果优于重组蛋白Ec-cLYZ和MEL。说明重组蛋白Ec-cLYZ-MEL对红细胞无溶血活性且具有良好的抑菌活性。

分类号： Q78%S859

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