稳定表达Cas9蛋白的HeLa细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘燕飞

作者： 刘燕飞;那雷;王晓钧

作者机构：

关键词： Cas9蛋白;HeLa细胞系;基因敲除效率

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2020 年 009 期

页码： 893-898

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立基于CRISPR-Cas9技术的基因敲除细胞文库,本研究利用慢病毒载体pMD2.G、pSPAX2(HIV-1的gag-pol表达质粒)和lentiCRISPR v2-Hyg包装慢病毒,感染HeLa细胞2 d后用400μg/mL潮霉素培养液筛选两周,获得稳定表达Cas9蛋白的多克隆细胞系.利用流式细胞分选系统分选及western blot鉴定获得9株HeLa-Cas9单克隆细胞系.为获得具有高效率敲除内源基因的HeLa细胞系,利用同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和GFP sgRNA的慢病毒感染HeLa-Cas9单克隆细胞系,经1μg/mL嘌呤霉素培养液筛选一周,流式细胞术检测表达绿色荧光蛋白细胞的百分比,以计算HeLa细胞株的敲除效率,进而建立了一株稳定表达Cas9蛋白的具有高敲除效率的HeLa单克隆细胞系.该细胞的Cas9敲除效率为87%,CCK-8检测结果表明其具有很好的细胞活性.本研究获得的具有高敲除效率的稳定表达Cas9蛋白的HeLa细胞系可以用于CRISPR敲除文库的转导,建立基因敲除细胞文库,为筛选参与特定功能的未知蛋白提供细胞平台.

分类号： Q78

  • 相关文献

[1]通过缺失大丽轮枝菌Vdku80构建其高效基因敲除受体菌株. 田李,刘娜,徐荣旗,曲志才,刘乾. 2014

[2]应用于基因编辑的核糖核蛋白复合体的构建与活性验证. 高伟欣,黄火清,赵晶,张鑫,杨宁,杨浩萌. 2022

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