大鲵虹彩病毒TaqManreal·timePCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周勇

作者： 周勇;曾令兵;孟彦;周群兰;张辉;高正勇;肖艺;孙建滨

作者机构：

关键词： 大鲵出血病;虹彩病毒;MCP基因;TaqMan实时荧光定量PCR

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2013 年 43 卷 000 期

页码： 18-25

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(Giantsalamanderiridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1392bp的片段,克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-MCP.经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pMD19-T-MCP重组质粒,作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增,制作标准曲线,建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法.制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.99019.组内重复试验的Ct值标准偏差为0.52%.检测结果显示,该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性,与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤鱼上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应,特异性好,检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数,约1.1*10^-3g/μL病毒核酸,较之常规PCR的敏感度高出约1000倍.本研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义.

分类号： S947.3

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