TRIM74对流感病毒复制机制影响的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 叶苗苗

作者： 叶苗苗;孙楠;李奇兵;石文军;王波;王广文;姜丽;陈化兰;李呈军

作者机构：

关键词： TRIM74;流感病毒;干扰素

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 010 期

页码： 1025-1033

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究三方基序蛋白74（TRIM74）对流感病毒复制的影响，本研究设计并合成靶向TRIM74基因的siRNA，即siTRIM74-331，将其转染A549细胞后，利用荧光定量PCR检测siTRIM74-331对细胞中TRIM74转录水平的干扰效率，利用细胞活力检测试剂盒检测该siRNA对细胞活力的影响。结果表明siTRIM74-331的干扰效率较好且不影响细胞活力。将siTRIM74-331转染A549细胞后感染禽流感病毒（AIV）A/WSN/1933株（WSN），并于感染后24 h、48 h分别进行噬斑滴定，结果显示干扰TRIM74的表达可抑制流感病毒的复制。利用慢病毒包装系统构建TRIM74过表达细胞系（A549-pLVX-TRIM74）和对照细胞系（A549-pLVX），并经qPCR及western blot鉴定正确后，将WSN株（MOI 0.01）分别感染上述两种细胞，并于感染后24 h、48 h收集细胞上清分别进行噬斑滴定。结果表明，过表达TRIM74能够显著促进流感病毒的复制。将WSN株（MOI 5）分别感染A549细胞和HEK293T细胞后，分别采用qPCR和western blot检测细胞中内源TRIM74的转录及蛋白表达水平，结果表明WSN能够刺激细胞内源TRIM74的转录与表达，推测宿主细胞可能通过增强TRIM74的表达响应流感病毒的感染。为探究TRIM74在宿主细胞天然免疫反应中发挥的作用，将不同剂量的表达质粒pTRIM74-V5转染HEK293T细胞，经western blot确定其能够在细胞中呈剂量依赖性表达后，将上述剂量的p TRIM74-V5与p RL-TK、pIFN-β-Luc报告质粒共转染HEK293T细胞（1组）；同时将上述剂量的pTRIM74-V5与p RL-TK、pISRE-Luc报告质粒共转染HEK293T（2组），24 h后感染仙台病毒（SeV）,12 h后采用双荧光素酶试验检测过表达TRIM74对IFN-β和ISRE启动子活性的影响。结果显示，转染空载体的对照细胞在感染SeV后上述两种启动子的活性均升高，而1组和2组细胞中该两种启动子的活性均极显著下降，且随pTRIM74-V5转染量的升高二者的活性均呈下降趋势。分别将SeV和poly（I:C）刺激TRIM74过表达及干扰其表达的HEK293T细胞，12 h后采用q PCR分别检测各组细胞中IFN-β和ISG56 mRNA的转录水平。结果显示，TRIM74过表达的各组细胞中IFN-β及ISG56 mRNA的转录水平均显著高于未刺激的Mock组细胞，且均极显著低于转染空载体的阴性对照细胞；干扰TRIM74表达的各组细胞中IFN-β及ISG56 mRNA的转录水平均显著高于未刺激的Mock组细胞，且均极显著或者显著高于转染NC siRNA的阴性对照细胞，表明TRIM74能够负调控细胞中相应干扰素的分泌。本研究结果首次表明TRIM74能够促进流感病毒的复制，并负调控宿主细胞中IFN-β信号通路，该研究丰富了流感病毒与宿主因子间的调控网络，为深入了解TRIM74蛋白的功能奠定了实验基础。

分类号： S852.65

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