人、牛和羊叠朊基因的表达及牛叠朊蛋白抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘永生

作者： 刘永生;唐江山;路伟;陈豪泰;孙德惠;才学鹏;张杰

作者机构：

关键词： 传染性海绵状脑病;叠朊;朊蛋白;基因表达;抗血清

期刊名称： 中国农业大学学报

ISSN： 1007-4333

年卷期： 2008 年 13 卷 03 期

页码： 14-18

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 叠朊(Dpl)是朊蛋白(PrP)的横向同源物,两者的功能密切相关。本研究旨在制备能够特异检测重组表达的或者动物组织中Dpl的抗血清,以用于研究Dpl的功能及其与PrP的关系。根据已克隆的汉族人、中国黄牛、甘肃土种羊的Dpl基因,将其Dpl成熟蛋白编码区分别定向克隆到表达载体pET-30a(+)上,将重组表达载体转入E.coliBL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达。将表达并纯化的牛重组Dpl免疫4只青紫蓝兔,制备牛Dpl的抗血清,SDS-PAGE分析表明人、牛和羊的重组Dpl在E.coli中获得了高效表达。用Ni-NTA树脂亲和层析和胶洗脱法纯化了上述表达产物,ELISA和West-blot分析表明,制备的牛Dpl抗血清与重组人、牛和羊的Dpl以及牛和羊睾丸组织的Dpl发生了特异性反应,却不与重组人、牛和羊的PrP发生反应。上述结果表明制备的Dpl抗血清可以作为人、牛和羊Dpl的检测试剂和研究材料。

分类号： S852`Q78

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