长角血蜱卵cDNA表达文库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘光远

作者： 刘光远;田占成;才学鹏;李知新;谢俊仁;王路;张林;龚真莉

作者机构：

关键词： 长角血蜱;卵;cDNA表达文库;构建

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2008 年 41 卷 07 期

页码： 2204-2208

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】以长角血蜱卵为材料构建高质量的长角血蜱卵cDNA表达文库,为进一步筛选克隆目的基因奠定基础。【方法】在无RNA酶污染的环境下从长角血蜱卵中提取RNA,进而纯化mRNA,采取oligo(dT)引物合成双链cDNA,定向克隆到λSCREEN载体。用PhageMaker extract对其进行体外包装以形成完整的噬菌体,转染大肠杆菌ER1647,测定库容量。并用构建的cDNA文库克隆已知的长角血蜱促卵泡激素基因。【结果】所构建长角血蜱卵cDNA表达文库的基础库容量约为1.38×106PFU,重组率为100%,扩增后文库的滴度为2×109PFU·ml-1。获得了目的基因,其序列与GenBank中的长角血蜱促卵泡激素(DQ248886)的核苷酸序列的同源性为97.8%。【结论】成功构建了长角血蜱卵cDNA表达文库。

分类号： Q78

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