基于RPA-CRISPR/Cas12a的MSTN基因编辑猪检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 迟顺顺

作者： 迟顺顺;吴丹;王楠;王婉洁;聂雨欣;牟玉莲;刘志国;朱振东;李奎

作者机构：

关键词： MSTN基因编辑猪;重组酶聚合酶扩增;核酸检测;CRISPR/Cas12a

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年 56 卷 008 期

页码： 3734-3748

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在建立一种基于重组酶聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification, RPA）和成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白12a（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 12a, CRISPR/Cas12a）系统的MSTN基因编辑猪检测方法，以满足基因编辑动物研发、育种等过程中核酸检测以及基因型鉴定的需求。本研究构建含有猪MSTN基因突变序列和野生型序列的标准质粒并设计靶向标准质粒的crRNA,基于RPA和CRISPR/Cas12a技术建立荧光报告和胶体金试纸条检测体系，筛选特异性识别标准质粒的crRNA、优化其反应条件并评价其检测灵敏度，最后通过检测猪耳组织样品评价本方法的准确性和稳定性。研究结果表明，该方法能够特异性识别MSTN基因2 bp碱基缺失序列和MSTN基因野生型序列。荧光报告体系最低可检测到4.1×10～1 copies·μL-1的标准质粒，胶体金试纸条体系最低可检测到4.1×10～3 copies·μL-1的标准质粒。通过对猪耳组织样本的检测，证明了该检测体系的准确性和可靠性。综上所述，本研究建立的MSTN基因编辑猪RPA-CRISPR/Cas12a检测方法具有操作简便、特异性和灵敏度高的特点，为MSTN基因编辑猪检测提供了重要技术支撑，具有广阔的应用前景。

分类号： S828

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