口蹄疫病毒VP1蛋白诱导犊牛甲状腺初代细胞凋亡的鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李营营

作者： 李营营;毛箬青;杨帆;曹伟军;郑海学

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;VP1蛋白;犊牛甲状腺初代细胞;细胞凋亡

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2014 年 08 期

页码： 838-845

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了制备和培养犊牛甲状腺初代细胞(CTY),并检测口蹄疫病毒VP1蛋白对其诱导的凋亡情况,采用原代细胞培养方法,取初生犊牛甲状腺制备初代细胞并培养。采用RT-PCR方法扩增口蹄疫病毒VP1基因,再用限制性内切酶EcoRⅠ+XhoⅠ酶切后定向克隆到表达载体pCAGGS中,构建重组质粒pCAGGS-VP1,转染CTY,用Western-blot检测口蹄疫病毒VP1蛋白在犊牛甲状腺初代细胞中的表达情况;通过显微镜观察转染的CTY细胞状态、经AV-PI双染色、检测线粒体膜电位变化和Hoechst-33258荧光染色来检测细胞凋亡。结果显示,成功制备了犊牛甲状腺初代细胞,构建的重组质粒可以在犊牛甲状腺初代细胞中表达,通过几种方法均证明口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导犊牛甲状腺初代细胞的凋亡,细胞凋亡率比空载体对照组高约2倍。结果表明,口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导CTY的凋亡,这一结果为深入研究口蹄疫病毒VP1蛋白凋亡功能域和VP1诱导的凋亡途径奠定了基础。

分类号： S852.659.6

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