大口黑鲈双RNA病毒VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张秋爽

作者： 张秋爽;马宝福;郑果;林强;梁红茹;牛银杰;罗霞;李宁求;付小哲

作者机构：

关键词： 大口黑鲈;大口黑鲈双RNA病毒;VP2蛋白;多克隆抗体

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2025 年 53 卷 007 期

页码： 18-25

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料.[方法]PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化.以纯化的重组VP2蛋白为抗原,皮下多点注射免疫新西兰大白兔,耳中央动脉采血并分离血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体,用BCA法测定纯化后抗体的浓度.通过Westernblot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性;采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价.[结果]PCR扩增获得了 1 266 bp的VP2基因片段.PCR和测序鉴定结果表明,重组质粒pET-VP2构建成功.VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了 64 ku的重组蛋白,符合预期大小.成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体,其质量浓度为10 mg/mL,效价为1∶1 024 000,可特异性识别LBBV VP2蛋白;血清中和试验结果显示,VP2多抗中和抗体效价为1∶64.[结论]成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白,制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体,该多抗对LBBV具有中和作用.

分类号： S941.41%S965.211

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