茶树简化EcoTILLING技术的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 金基强

作者： 金基强;陈亮;姚明哲;王新超;马春雷

作者机构：

关键词： 茶树;CELⅠ;EcoTILLING;SNP

期刊名称： 茶叶科学

ISSN： 1000-369X

年卷期： 2010 年 30 卷 01 期

页码： 19-26

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： EcoTILLING(Ecotype Targeting Induced Local Lesions IN Genomes)可快速检测自然群体中的SNP(Single Nucleotide Polymorphism)等DNA变异。第一次建立了简化的茶树EcoTILLING技术体系:首先筛选扩增目的基因的特异PCR引物;然后通过CELⅠ酶切PCR产物优化实验,确定酶切时间20 min、10×buffer组成为250 mmol/L Tris-HCl(pH7.4)、150 mmol/L KCl、15 mmol/L MgSO4、4μg/mL BSA和0.04%Triton x-100,反应温度为47.5℃,酶量为1.8μL CJE(Celery Juice Extract)/10μL反应体系时,酶切的谱带信号较强、特异性高;初步确定合适的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测条件为凝胶浓度5%、上样量4～5μL、有效分离长度要达到15 cm。利用上述简化的EcoTILLING对6份茶树种质870 bp的PPO基因片段实现了分型,经测序验证酶切产生的谱带与6份种质内部或不同种质间的SNP位置吻合。

分类号： S571.1

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