马蔺ISSR-PCR反应体系的建立与优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王育青

作者： 王育青;王晓晶;王建光

作者机构：

关键词： 马蔺;均匀设计;ISSR-PCR

期刊名称： 中国草地学报

ISSN： 1673-5021

年卷期： 2010 年 32 卷 02 期

页码： 80-85

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以内蒙古呼和浩特市近郊野生马蔺DNA为模板,采用均匀设计,通过5因素5水平和5因素3水平两轮均匀优化试验,对影响ISSR-PCR扩增结果的一些因素(Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA浓度等)进行优化筛选,建立了适合马蔺的最佳ISSR-PCR反映体系:在25μl反应体系中,包括2.5μl 10×PCR Buffer、2.0mmol/L Mg2+、2.5μmol/L dNTP、1μmol/L引物1、.5U TaqDNA聚合酶、50ng模板DNA。在此基础上对扩增程序中的循环次数、退火温度进行筛选,获得的扩增程序为:94℃预变性3min;然后进行40个循环(94℃变性45s,52.3～60.5℃退火30s,72℃延伸1.5 min);循环结束后,72℃延伸5min。

分类号： S688.4

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