苏云金芽孢杆菌cryAa14基因的分离、克隆及其表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 任莹博

作者： 宋福平;陈中义;李国勋;王勤英;黄大昉;张杰

作者机构：

关键词： 苏云金芽孢杆菌

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2004 年 12 卷 2 期

页码： 188-191

收录情况： 北大核心

摘要： Bt25是中国自行分离的对小菜蛾(Plutella xylotella)具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)，经 PCR-RFLP鉴定含有crylAa基因。以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法，设计1对特异引物，以Bt25质粒DNA为模板扩增crylAa全长基因。序列测定结果表明，该基因编码区为3 552 bp，编码1 183个氨基酸，分子量为133．7 kD，pI 4．755。该基因序列已在GenBank注册，登记号为AYl97341，并获得正式命名crylAal4。在氨基酸序列918-1180间，和已知的11种 CrylAa存在22-23个氨基酸的差异(其中1094-1097的4个氨基酸无对应序列)，而这段区域和CrylAb氨基酸序列的对应区域无差异。crylAal4全长基因插入Bt表达载体，获得了重组表达质粒pBYBl，转化Bt无晶体突变株HD73cry．，经过抗性筛选、DNA酶切分析和PCR检测，证实转化成功。SDS-PAGE分析表明，该基因在上述受体中能正常表达133 kD蛋白。杀虫生物测定结果表明，crylAal4表达产物对小菜蛾幼虫具有显著的毒杀作用，与crylAal2进行比较，毒力无明显差异。这种单基因菌株的发现及其基因的获得，为害虫抗性研究和高效工程菌的构建提供了重要实验材料。

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