表达马传染性贫血病毒受体和荧光素酶报告基因的293细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王登峰

作者： 王登峰;张淑琴;马学恩;简子建;周建华

作者机构：

关键词： EIAV;受体;LTR;荧光素酶;细胞系

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2007 年 47 卷 6 期

页码： 1070-1075

收录情况： CSCD

摘要： 为了在体外精确、简便地测定马传染性贫血病毒（EIAV）的中和抗体和研究不同毒株与受体的亲和性，克隆了马慢病毒受体1（ELR1）cDNA并插入真核表达载体pcDNA3．1（＋），构建了表达载体pELR1。该载体瞬时转染293细胞后，经Western blot和间接免疫荧光（IFA）检测，确认了ELR1的表达。在pELR1质粒的基础上，插入EIAV疫苗株前病毒基因组转录调控区LTR以及萤火虫荧光素酶报告基因（Luc）构建了表达载体pELR1-LTR-Luc，并转染293细胞，建立了ELR1-LTR-Luc（293-E）细胞系。该细胞系能稳定表达ELR1基因，并且能在LTR的调控下表达萤火虫荧光素酶基因。用1000TCID_(50)的EIAV驴胎皮肤细胞疫苗株D18V13接种该细胞，24h后检测其荧光素酶活性是未接毒对照的3．15倍。同时用IFA检测证明了病毒在细胞内的增殖。EIAV强毒株L21的接毒试验显示，ELR1．LTR（293-E）细胞的萤火虫荧光素酶活性与该毒株的接毒量在10~(-2)～10~(-7)稀释范围内呈正相关。该细胞系传35代后，外源基因的表达特征未发生改变。该细胞系的建立为进一步开展EIAV与细胞受体相互作用以及中和抗体评价等研究奠定了重要基础。

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