中华鲟Vtg间接竞争ELISA检测方法的建立和应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 冷小茜

作者： 冷小茜;叶欢;杜浩;李创举;危起伟

作者机构：

关键词： 中华鲟;卵黄蛋白原;ELISA;抗血清

期刊名称： 水生生物学报

ISSN： 1000-3207

年卷期： 2018 年 04 期

页码： 779-785

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)被认为是一种理想的雌激素和类雌激素标志物,通过建立一种中华鲟Acipenser sinensis血浆Vtg水平的检测方法,进而开发一项中华鲟性腺成熟度的诊断技术。首先通过RACEPCR方法扩增得到中华鲟vtg基因cDNA序列,氨基酸序列分析预测其蛋白分子量大小为196 k D。构建Vtg功能区段融合原核表达载体p ET32a(+)-vtg并表达纯化重组蛋白,并以重组蛋白免疫兔子获得多克隆抗血清,Western blotting检测显示抗血清的特异性较好。以纯化的中华鲟重组Vtg蛋白为抗原,中华鲟Vtg多克隆抗血清为抗体,建立了中华鲟血浆Vtg的间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA),标准曲线线性回归方程为y=–0.2916x+0.6794,相关系数R~2为0.9976。该方法检测的灵敏度为4.12μg/m L,最低检测限为0.3μg/m L,批内和批间变异系数分别为2.52%和3.42%。通过对不同发育时期雌性中华鲟血样检测,表明此ELISA方法可初步用于雌性中华鲟性腺发育时期监测。

分类号： S917.4

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