稳定表达T7 RNA聚合酶PK-15细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄俊华

作者： 黄俊华;贺番;孙元;张鑫;常天明;李宏宇;仇华吉

作者机构：

关键词： 逆转录病毒载体;T7 RNA聚合酶;稳定细胞系

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2011 年 33 卷 5 期

页码： 358-361

收录情况： CSCD

摘要： 为构建稳定表达T7 RNA聚合酶(RNAP)的猪肾细胞系(PK-15)，本研究采用PCR方法，以E.coli BL21(DE3)细菌基因组为模板扩增T7 RNAP基因，将其克隆到逆转录病毒载体pLXSN中，构建重组质粒 pLXSN-T7。采用脂质体将pLXSN-T7转染至PT67细胞中，经G418筛选培养获得重组逆转录病毒rMLV-T7，将其接种于PK-15细胞进行G418加压筛选和纯化；应用PCR、间接免疫荧光试验及T7启动子控制下的红色荧光蛋白的重组表达质粒(pET-RED)进行瞬时表达，检测T7 RNAP的表达及活性，结果表明筛选所得的细胞系PK/T7的不同代次均具有转录活性。本研究建立稳定表达T7 RNAP的细胞系PK/T7，为实现细胞内T7启动的转录和猪源RNA病毒等的反向遗传操作提供了有效的方法。

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