柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 韩红玉

作者： 韩红玉;黄兵;赵其平

作者机构：

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;孢子化卵囊;cDNA文库

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2001 年 17 卷 06 期

页码： 69-72

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 用建立表达性文库的方法 ,构建了Eimeriatenella孢子化卵囊噬菌体ZAP表达性cDNA文库。首先用TRIzol试剂盒从E .tenella孢子化卵囊中提取总RNA ,再用Oligo(dT) 1 2 纤维素柱从总RNA中分离mRNA ,以mRNA为模板 ,Oligo(dT) 1 8Linker Primer为引物 ,反转录合成cDNA第一链 ,再在DNA聚合酶Ⅰ作用下置换合成第二链cDNA。cDNA第二链合成后用PfuDNA聚合酶补平XhoⅠ位点 ,再与EcoRⅠAdapters连接 ,经XhoⅠ酶切后 ,凝胶电泳回收 5 0 0bp～ 4 .0kp之间的cDNA片段 ,纯化后的双链cDNA与载体ZAPExpressvector连接。体外包装后得到E .tenella孢子化卵囊的cDNA表达性文库 ,经测定该文库的容量为 6× 10 6 ,扩增后文库的滴度为 1× 10 1 1 Pfu mL ,经PCR测定 ,该文库的重组率为 96%。

分类号： Q785

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