烟草四种重要土传病原菌多重PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王荣波

作者： 王荣波;叶劲松;吴平;刘裴清;林伟;李本金

作者机构：

关键词： 烟草;土传病害;多重PCR;分子检测

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2023 年 53 卷 006 期

页码： 1208-1221

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为快速准确地鉴定和区分烟草生产中的4种土传病害病原菌-青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)、软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)、寄生疫霉(Phytophthora parasitica)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),通过设计和筛选特异性引物,建立多重PCR反应体系,并对体系中的引物用量和退火温度进行优化,检测优化后体系的特异性和灵敏度,验证其在烟草组织、土壤样品及种子样本中病原菌检测的实用性.结果表明,反应体系中最优的引物用量组合为RsRipNTF3/RsRipNTR3 各 0.9 μL、PccTF4/PccTR4 各 0.6 μL、PpRhTF1/PpRhTR1 各 1.2 μL 和 FoP450TFl/FoP450TRl 各0.8 μL,最佳退火温度为61.1℃.该体系可分别扩增出4种病原菌的特异性片段,大小分别为511、361、669和840 bp,对病原菌DNA的检测灵敏度可达50 pg·μL-1.植物组织和土壤样本检测结果表明,所建立的多重PCR检测方法能够准确地检测出其中的病原菌;采用该检测方法对80份烟草商品种进行检测,发现其中4个样本携带有青枯雷尔氏菌或尖孢镰刀菌,而未检测到软腐果胶杆菌和寄生疫霉.本研究建立的多重PCR检测方法可以灵敏、准确、高通量检测4种烟草土传病原菌,为烟草土传病害的准确诊断和早期防控提供可靠的技术方法.

分类号： S432.44

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