抗犬瘟热病毒犬源化嵌合单链抗体scFv-Fc的制备与活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘雅坤

作者： 刘雅坤;毕振威;夏兴霞;莫菲;徐司雨;钱晶;谭业平;诸玉梅;赵建军

作者机构：

关键词： 犬瘟热病毒;中和活性;单链抗体;嵌合抗体

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 55 卷 012 期

页码： 5762-5773

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为减少和改善鼠源单克隆抗体在犬临床治疗中的异源性和功效，用RT-PCR方法从分泌抗犬瘟热病毒（CDV）中和单克隆抗体的鼠源杂交瘤细胞中扩增抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）,通过Linker将VH和VL连接获得单链抗体（scFv）基因，选择犬源抗体IgG B恒定区（Fc）连接到scFv的C末端获得犬源化嵌合单链抗体（scFv-Fc）基因；分别构建鼠源scFv与犬源化scFv-Fc的原核表达载体，通过大肠杆菌表达、纯化，用ELISA、IPMA、细胞融合抑制和中和试验检测表达抗体的特异性和中和活性。结果显示：CDV鼠源scFv、犬源化scFv-Fc的ELISA最低检出浓度分别为14.38和102.75μg·mL-1;与表达的CDV H蛋白和CDV均发生特异性反应；能够抑制CDV H和F蛋白介导的细胞膜融合，完全保护细胞不出现病变的最低浓度分别为0.72和0.64μg·mL-1。本研究成功制备了鼠源scFv与犬源化scFv-Fc嵌合抗体，为犬瘟热的临床治疗提供了候选抗体药物。

分类号： S859.797

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