猪瘟病毒中和性单克隆抗体制备及阻断ELISA方法建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨利

作者： 杨利;张浩明;李丁;郑其升;芮荣

作者机构：

关键词： CSFV;高效中和抗体;阻断ELISA;毕赤酵母;重组CSFV E2蛋白

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2022 年 54 卷 005 期

页码： 68-74

收录情况： 北大核心

摘要： 采用毕赤酵母表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接免疫荧光(IFA)筛选,获得了 17株特异性单抗.经病毒中和试验(VNT)验证,上述单抗均具有CSFV中和活性,其中单克隆抗体3H9的病毒中和效价最高,大于1 ∶ 10 240.采用HRP标记的CSFV单抗3H9为阻断抗体,配合酵母表达的CSFV E2蛋白作为包被抗原,建立了一种用于检测猪血清中CSFV中和抗体的阻断ELISA方法.该方法优化后的抗原包被浓度为0.5pg/mL,阻断抗体稀释度为1 ∶ 8 000.通过对100份阴性猪血清的检测,确定该方法的阻断率cut-off值为30%.该方法敏感性高,对中和抗体效价低至1∶ 16的血清检测仍呈阳性;特异性强,仅与CSFV抗体阳性猪血清呈阳性反应,与其他猪病病毒及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体阳性猪血清均呈阴性反应;良好的可重复性,批内、批间变异系数分别为0.90%~3.21%、1.89%~6.57%,均小于10%.对188份现有猪血清检测结果显示,该方法与病毒中和试验和IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合率分别为96.3%、94.7%.用该方法对南京市浦口区某养殖场猪瘟疫苗免疫猪血清进行检测,抗体阳性率为80.8%(189/234),证明了该疫苗免疫效果良好.此外,该方法为一步法,与现有方法相比,检测过程缩短至40min.试验结果表明,利用酵母表达E2蛋白并制备中和抗体,建立了一种更加高效检测猪瘟中和抗体的阻断ELISA方法.

分类号： S852.53

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