猪γ-干扰素的克隆表达及单抗的潜在应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 娄忠子

作者： 娄忠子;兰喜;李建强;李学瑞;李志勇;殷相平;柳纪省

作者机构：

关键词： 猪γ-干扰素;融合表达;单克隆抗体;潜在应用

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2010 年 0 卷 01 期

页码： 173-179

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以刀豆素A(ConA)刺激长白猪外周血单个核细胞(PBMC),提取的总RNA为模板,采用一步法RT-PCR扩增出包含猪γ-干扰素(PoIFN-γ)完整基因的片段。将完整的PoIFN-γ基因亚克隆到pET-32a(+)上,构建pET-IFN-γ融合表达载体,转化入Rosetta(DE3)后IPTG诱导表达,得到大小约为36.8kD的目的蛋白。将目的蛋白检测及纯化后免疫后BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,最终筛选出3株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞。ELISA叠加试验显示,3株单抗针对相同或邻近的PoIFN-γ抗原表位,制备的腹水中单抗间接ELISA效价为1×104。选取单抗IF-2株进行单抗的潜在应用研究,Westernblotting分析结果显示单抗IF-2株能与融合表达蛋白产生特异性反应,与pET-32a(+)标签蛋白无反应;间接免疫荧光检测(IFA)发现,在采用腺病毒表达系统表达PoIFN-γ的HEK-293细胞中散在大量特异性荧光。

分类号： Q789`S852.5

  • 相关文献

[1]抗猪γ-干扰素单克隆抗体的制备和鉴定. 余斌,张强,闫丽萍,仇华吉,王云峰,陈焕春,童光志. 2007

[2]重组猪γ-干扰素的表达与纯化. 王荣谈,郭佳宏,彭丽英,廖学文,姚慧娟,樊生超,缪德年. 2014

[3]猪圆环病毒2型cap基因与猪γ-干扰素基因双表达载体的构建及稳定表达. 娄忠子,杨彬,兰喜,李学瑞,李志勇,殷相平,李宝玉,柳纪省. 2010

[4]生淀粉结合域SBD及糖化酶基因在毕赤酵母中的融合表达. 刘海余,王青艳,米慧芝,朱绮霞,廖思明,秦艳,申乃坤,黄日波. 2016

[5]抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达策略. 杨勇,金德俊,余维维,秦梦茹,吴碧舟,徐泽平,饶犇. 2017

[6]J亚群禽白血病病毒SUJ及兔IgGFc基因在腺病毒表达系统中的融合表达. 梅梅,钱科,唐应华,秦爱建,侯继波. 2016

[7]黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的原核表达及其蛋白产物的Western-blot分析. 安玉麟,孙瑞芬,张鹤龄,郭树春,闫素丽. 2009

[8]蓖麻毒素B链的克隆表达与鉴定. 邢丽杰,罗小玲,马青原,刘文森. 2009

[9]猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣA 2.5kb基因片段的分子克隆及其表达. 邵美丽,刘思国,王春来,郭洋,张秀华,佟恒敏,郭设平. 2005

[10]乌骨鸡Cathelicidins类抗菌肽基因在大肠杆菌中的融合表达与抑菌活性. 吴静,梁永利,史玉颖,李玉峰,马秀丽,姜亦飞,宋敏训. 2013

[11]抗菌肽融合表达研究进展. 马青山,余占桥,韩冰,张日俊. 2011

[12]亲和标签在重组蛋白表达与纯化中的应用. 陈爱春,彭伟,汪生鹏. 2012

[13]新型Resilin-R5融合蛋白的大肠杆菌表达和纯化. 毛争争,柳永,孙燕,周曼,刘子铎,汤江武. 2014

[14]利用hAPOA1原核蛋白生产兔多克隆抗体. 徐志伟,赵杰,刘伟忠,刘照亭,王期. 2016

[15]抗菌肽基因BnPCD842895克隆表达及活性检测. 黄金,黄军艳,柯涛,周瑢,曹慧慧,马向东,童超波,于景印,吴南. 2013

[16]抗菌肽Magainin Ⅱ的原核表达与抗菌活性分析. 卢艳敏,崔海信,王承民,何宏轩. 2011

[17]猪繁殖与呼吸综合征病毒重组质粒pEGFP-NSP9的构建与表达. 吴锦艳,田宏,陈妍,尚佑军,刘湘涛. 2012

[18]家蚕核型多角体病毒egt基因的融合表达. 季平,张国英,沈卫德,何家禄. 2000

[19]高效表达N-乙酰高丝氨酸内酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其酶学性质的研究. 张美超,周志刚,曹雅男,何夙旭,刘玉春,姚斌. 2010

[20]油菜抗菌肽基因BnLTP1的克隆表达及活性. 曹慧慧,董彩华,于景印,柯涛,童超波,黄军艳,刘胜毅. 2016

作者其他论文 更多>>

微信小程序