美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 欧云文

作者： 欧云文;王勤;马炳;马小元;代军飞;贾宁;丁耀忠;张永光;张杰

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;美洲型;N蛋白;原核细胞;基因表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国生物制品学杂志

ISSN： 1004-5503

年卷期： 2017 年 09 期

页码： 948-953

收录情况： CSCD

摘要： 目的原核表达美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(North American genotype porcine reproductive and respiratory syndrome virus,NA-PRRSV)N蛋白,并制备多克隆抗体。方法以NA-PRRSV QH-08毒株的RNA为模板,扩增N蛋白编码片段,克隆入原核表达载体p ET30a(+),构建重组表达质粒pET30a-NA-PRRSV-N,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达6 h。采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化表达的重组蛋白,复性后的重组N蛋白与弗氏佐剂混合乳化,经背部多点免疫新西兰大耳白兔,制备兔抗NA-PRRSV-N蛋白多克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验检测多克隆抗体的特异性,间接ELISA法检测血清抗体效价。结果经PCR、双酶切和测序鉴定,重组表达质粒p ET30a-NA-PRRSV-N构建正确;重组N蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为24 000,纯度可达95%以上,可与NA-PRRSV阳性猪血清发生特异性反应;制备的多克隆抗体能够识别重组N蛋白和全病毒抗原,抗体效价>1∶25 600,显著高于商品化疫苗组。结论成功在大肠埃希菌中表达了NA-PRRSV N蛋白,并制备了其多克隆抗体,为NA-PRRSV检测方法的建立奠定了基础。

分类号： S852.651

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