基于遗传密码子扩展技术的口蹄疫病毒VP1蛋白位点特异性荧光标记

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郝荣增

作者： 郝荣增;卢炳州;杨洋;毛玉涵;王姿逸;赵陇和;李亚军;茹毅;郑海学

作者机构：

关键词： 蛋白质标记;口蹄疫病毒;VP1蛋白;点击化学;非天然氨基酸

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年 55 卷 004 期

页码： 427-434

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将荧光标记分子引入细胞内表达的口蹄疫病毒（FMDV）结构蛋白VP1的特异性氨基酸位点，从而实现在活细胞内对蛋白质的动态可视化标记。先对VP1蛋白中非天然氨基酸（UAA）插入位点进行筛选，利用遗传密码子扩展技术将UAA定点插入到VP1蛋白，并通过生物正交点击化学反应引入荧光分子，观察细胞内的荧光标记蛋白；进一步通过间接免疫荧光试验验证荧光标记的蛋白。结果显示，成功筛选出VP1蛋白中UAA插入效率较高的氨基酸突变位点，并可以通过UAA控制VP1蛋白的表达。证实荧光分子染料DIBO-Alexa Fluor-488与VP1蛋白上的UAA发生点击化学反应可以进行活细胞染色，同时进行间接免疫荧光染色，可以观察到2种染色结果存在共定位趋势。本研究采用新方法实现了活细胞内FMDV VP1蛋白特异位点的荧光标记，为VP1蛋白功能研究和在细胞内示踪FMDV的感染及复制过程奠定了基础。

分类号： S852.65

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