玉米大斑病菌实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 代玉立

作者： 代玉立;刘晓菲;甘林;兰成忠;滕振勇;杨秀娟

作者机构：

关键词： 大斑凸脐蠕孢;实时荧光定量PCR;内参基因;扩增效率;表达稳定性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2023 年 004 期

页码： 867-882

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 由异宗配合的子囊菌大斑凸脐蠕孢（Exserohilum turcicum）引起的大斑病（northern leaf blight）是我国玉米（Zea mays）和高粱（Sorghum bicolor）生产的重要真菌病害。为筛选适用于玉米大斑病菌实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR; qRT-PCR）的内参基因，本研究以转录延伸因子1α（elongation factor-1α, EF-1α）、新生多肽相关复合物α多肽（nascent-polypeptide-associated complex alpha polypeptide, NACA）、60S核糖体蛋白L2（60S ribosomal protein L2, RPL2）、60S核糖体蛋白L37a（60S ribosomal protein L37a,RPL37A）、泛素结合酶（ubiquitin-conjugating enzyme, UBC）、α微管蛋白（α-tubulin, TUBA）、肌动蛋白（actin,ACT）和β微管蛋白（β-tubulin, TUBB）为候选内参基因，以玉米大斑病菌4个不同菌株、3个不同发育阶段、体内侵染4个不同时期以及苯醚甲环唑胁迫4个不同时间的样品为实验材料，通过qRT-PCR技术测定玉米大斑病菌各候选内参基因在上述不同条件下的表达量，利用geNorm（v3.5）、NormFinder（v0.953）、BestKeeper（v1.0）、Delta-CT以及RefFinder（http://blooge.cn/RefFinder/）等分析方法综合评价候选内参基因的表达稳定性。同时，分别以筛选的稳定性较好和较差的内参基因，分析玉米大斑病菌羊毛甾醇14α去甲基化酶（lanosterol 14α-demethylase, CYP51）基因在苯醚甲环唑胁迫下的表达规律。结果表明，8个候选内参基因的扩增效率范围为90.3%～97.8%（r＞0.99），熔解曲线峰图均为单一峰，符合qRT-PCR的扩增效率要求。TUBA和TUBB适于做玉米大斑病菌不同菌株间基因表达分析的内参基因；RPL2和TUBA是不同发育阶段表达较稳定的内参基因；NACA和TUBA是体内侵染不同时期较理想的内参基因；ACT适于做苯醚甲环唑胁迫不同时间基因表达分析的内参基因。qRT-PCR分析表明，在苯醚甲环唑胁迫下，玉米大斑病菌CYP51基因的表达量随时间的推移显著增加，胁迫24 h时，表达量达到最大，胁迫36 h表达量显著下调（P＜0.05）。以稳定性较好的ACT作为内参基因时，与未胁迫组相比，苯醚甲环唑胁迫可显著诱导玉米大斑病菌CYP51基因上调表达（P＜0.05）。但是，以稳定性较差的TUBB作为内参基因时，得出了2个菌株的CYP51基因表达量相反的结果。本研究为玉米大斑病菌基因表达定量分析提供了有效的校正工具，确保基因定量分析的准确性，为进一步研究玉米大斑病菌抗药基因过表达提供了参考依据。

分类号： S435.131.4

  • 相关文献

[1]杂交兰实时荧光定量PCR内参基因的筛选. 林榕燕,钟淮钦,黄敏玲,樊荣辉,吴建设. 2018

[2]阳桃(Averrhoa carambola)实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证. 李笑平,朱雅婷,赵亚梅,陈蕾,任惠,吴沙沙,翟俊文. 2024

[3]高温胁迫下茄子qRT-PCR内参基因筛选及稳定性分析. 李植良,罗少波,陈日远,金庆敏,黎振兴,李德明,孙保娟,孙光闻. 2017

[4]双孢蘑菇内参基因的筛选与矫正. 赵建霞,沈颖越,冯伟林,金群力,宋婷婷,范丽军,蔡为明. 2019

[5]葡萄不同摘心处理下qRT-PCR内参基因的筛选与验证. 赖呈纯,潘红,张静,王琦,高慧颖,陈源,黄贤贵. 2019

[6]铝处理下绣球实时荧光定量PCR内参基因筛选及验证. 陈双双,齐香玉,冯景,陈慧杰,王华娣,秦紫艺,邓衍明. 2021

[7]牧草盲蝽实时定量PCR内参基因的筛选. 贾冰,马亿,庞保平,单艳敏,鲍青龙,韩海斌,谭瑶. 2019

[8]茉莉花实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证. 齐香玉,陈双双,冯景,王华娣,邓衍明. 2020

[9]基于基因组和转录组数据的胡椒内参基因鉴定. 胡丽松,吴思婷,段兴帅,岑怡,苏岳峰,范睿,伍宝朵,郝朝运. 2020

[10]出芽短梗霉菌株PA-2胁迫下藜qRT-PCR内参基因的筛选与验证. 刘晓芳,程亮,郭青云. 2024

[11]基于高通量测序的梨果实常用内参基因表达稳定性分析. 王月志,戴美松,蔡丹英,施泽彬. 2019

[12]琥珀蚕内参基因的克隆及表达稳定性检测. 陈安利,钟健,刘增虎,李琼艳,廖鹏飞,杨伟克,董占鹏. 2018

[13]大灰象甲实时定量PCR内参基因的筛选. 李晓,李建文,成波,李伟,孙文秀,高华援,鞠倩,姜晓静,杜龙,曲春娟,曲明静. 2018

[14]多孢木霉HZ-31菌株胁迫下野燕麦内参基因的选择. 朱海霞. 2021

[15]荻草谷网蚜两个内参基因的克隆及表达谱分析. 张思宇,于苗苗,王文凯,范佳,陈巨莲. 2023

[16]民猪外周血单核细胞实时荧光定量PCR内参基因的筛选. 马红,刘宇,汪亮,王文涛,吴赛辉,何鑫淼,刘娣. 2017

[17]大白菜-结球甘蓝易位系实时荧光定量PCR内参基因的筛选. 崔菲菲,孟川,王彦华,赵建军,陈雪平,申书兴,顾爱侠. 2018

[18]稻粒黑粉病菌实时荧光定量PCR内参基因筛选. 盘林秀,王娜,王爱军,夏园,付成林,殷得所,郑爱萍. 2018

[19]银杏实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择与验证. 苏西娅,石元豹,杨晓明,汪贵斌,曹福亮. 2019

[20]龙眼果实发育实时荧光定量PCR内参基因的筛选. 王淳璐,王彬,寇译丹,胡文舜,陈秀萍. 2021

作者其他论文 更多>>

微信小程序