含PRRS病毒ORF5的伪狂犬病病毒TK基因缺失转移载体的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 仇华吉

作者： 仇华吉;周彦君;孔令达;张绍杰;钱平;王柳;童光志

作者机构：

关键词： 伪狂犬病病毒;TK基因;基因缺失;转移载体

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2000 年 04 期

页码： 46-49

摘要： 提取伪狂犬病病毒 ( PRV) Bartha-K6 1株基因组 DNA,用限制性内切酶 Kpn I充分消化 ,回收 5 .9kb片段 ( J片段 ) ,将其克隆于质粒 p UC1 1 9Kpn I位点上 ,获得 p BKJ。用两对针对 PRV TK基因的特异性引物对重组质粒进行 PCR鉴定 ,证明其中含有 PRVTK基因。然后用 Kpn I、Pst I和 Bam HI等限制性内切酶对其进行酶切分析 ,确定了克隆片段的物理图谱。进一步研究证实 TK基因位于其中的 Kpn I- Bam HI或 Kpn I- Pst I片段中。然后亚克隆此 Kpn I- Pst I片段 ,并进行了序列测定 .用 Acc I删去 378bp后 ,并插入CMV启动子控制下的猪生殖 -呼吸道综合征病毒 ( PRRSV) ORF5 ,构建了转移载体质粒p Bd TK- CMV- ORF5。本研究为 PRV活载体的改造和利用奠定了基础。

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