猪生殖与呼吸综合征病毒5′非翻译区序列的反向遗传操作

文献类型： 中文期刊

第一作者： 高飞

作者： 高飞;姚火春;孙志;王金勇;袁世山

作者机构：

关键词： 猪生殖与呼吸综合征病毒;感染性克隆;体外转录;转染;RNA印迹

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2007 年 37 卷 08 期

页码： 655-660

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR获得在病毒基因组5′非编码区(5′UTR)和ORF1起始密码子之间插入NdeⅠ的全长克隆pTLNd4,并以此为基础将5′UTR替换为欧洲株的5′UTR,获得全长克隆pTLV8。以体外转录的RNA转染MARC-145细胞。结果显示,pTLNd4产生了细胞病变(CPE),而pTLV8未产生。通过RT-PCR和Northern blot试验,分别对这2株突变病毒的基因组RNA复制和亚基因组mRNA转录水平进行了分析,同时还对pTLNd4进行了病毒学试验。证实,它们与亲本病毒无论从分子生物学水平或病毒学水平都无明显差异;pTLV8虽未产生CPE,但在病毒传代细胞中检测到了基因组RNA,说明替换不同基因型5′UTR的突变病毒虽然丧失了复制能力和感染性,但仍然能够提供病毒RNA合成所需要的顺式调控因子。

分类号： S852.65

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