正交设计优化南方根结线虫RAPD-PCR体系

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴篆芳

作者： 曹坳程;郭美霞;王秋霞;李园;颜冬冬;毛连纲;马涛涛

作者机构：

关键词： 南方根结线虫;RAPD-PCR;正交设计;条件优化

期刊名称： 中国植保导刊

ISSN： 1672-6820

年卷期： 2012 年 32 卷 10 期

页码： 5-10

收录情况： 北大核心

摘要： 以南方根结线虫(Meloidogyne incognita)DNA为模板,对影响南方根结线虫RAPD-PCR扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立南方根结线虫RAPD-PCR反应最佳体系。应用L16(45)正交设计研究了Taq酶、10×PCR buffer、dNTP、primer、模板DNA对扩增反应的影响。结果表明,南方根结线虫RAPD-PCR优化体系为20μL体系中含模板3μL、10μmol/L引物1.5μL、10×反应缓冲液2.5μL、2.5 mmol dNTP mixture 2.4μL、Taq DNA聚合酶0.4μL。在此基础上筛选出扩增稳定、多态性丰富的RAPD引物,并通过梯度PCR试验,确定了引物最佳退火温度。该优化RAPD-PCR反应体系具有良好的稳定性和重现性,可应用于南方根结线虫不同居群间亲缘关系和遗传多样性的分析。

分类号： S432.45

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