牛胰腺核糖核酸酶A的基因克隆、表达及初步鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张泉

作者： 张泉;袁燕;朱鸿飞;张鑫宇;孙怀昌

作者机构： 扬州大学兽医学院;中国农业科学院生物制品工程技术中心

关键词： RNaseA;克隆;表达;鉴定

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2006 年 39 卷 06 期

页码： 1248-1252

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的为了避免在制备基因治疗或基因免疫的质粒时使用动物源性的核糖核酸酶A(RNaseA)。方法提取牛胰腺总RNA,利用RT-PCR扩增出牛核糖核酸酶AcDNA,RT-PCR产物克隆到pGEM-T载体测序验证后,将此cDNA亚克隆到大肠杆菌分泌型表达载体pEZZ18中。结果SDS-PAGE电泳显示其转化菌经温度诱导后能表达预计的大小为28kD重组蛋白。用渗透法释放出表达产物,将其加入到经碱裂解粗提的质粒DNA中并孵育0.5h,琼脂糖凝胶结果表明表达产物能很好地去除细菌的RNA并且不降解超螺旋质粒DNA。结论在质粒的纯化过程中,重组牛核糖核酸酶可以替代动物源性的RNaseA。

分类号： S823`Q78

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