剑尾鱼卵黄蛋白原基因片段克隆、表达及蛋白检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘春

作者： 刘春;李凯彬;王芳;聂湘平;吴淑勤

作者机构：

关键词： 剑尾鱼;卵黄蛋白原;原核表达;检测

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2007 年 14 卷 06 期

页码： 883-888

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究通过对剑尾鱼(Xiphophorus helleri)卵黄蛋白原基因片段的克隆和表达,建立了剑尾鱼卵黄蛋白原蛋白检测方法。根据已发表的底(Fundulus heteroclitus)卵黄蛋白原mRNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出1段1118 bp的剑尾鱼卵黄蛋白原cDNA片段,序列分析表明该片段与其他鱼类卵黄蛋白原基因序列相似性较高,其中与底和食蚊鱼(Gambusia affinis)的同源性分别达87.4%和96.7%。在对该片段所编码氨基酸序列可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,预期得到258个氨基酸的表达蛋白。表达载体转入大肠杆菌DH5α,经热诱导后,SDS-PAGE分析有29 kD的表达蛋白产生,与预期相符。以重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗血清。雌激素(β-雌二醇)对剑尾鱼诱导后,用重组蛋白抗血清作一抗,进行Westernblot分析。结果表明,该抗血清能与剑尾鱼卵黄蛋白原特异结合,可应用于剑尾鱼卵黄蛋白原的检测。卵黄蛋白原是环境雌激素研究中较为特异、灵敏的生物标志物,剑尾鱼卵黄蛋白原检测方法的建立,为剑尾鱼环境监测应用提供良好基础。

分类号： Q78

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