牛病毒性腹泻病毒一步法微滴数字PCR检测方法的建立与初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 叶京飞

作者： 叶京飞;郭利;刘占悝;李建友;李智杰;孙飞雁;董清平;程悦宁

作者机构：

关键词： 牛病毒性腹泻病毒;一步法;微滴式数字PCR;定量检测

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年 53 卷 001 期

页码： 1-8

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)一步法微滴数字PCR(RT-ddPCR)方法,本研究在一步法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法的基础上,设计BVDV的特异性引物和探针,对RT-ddPCR试验中的反转录酶、退火温度、引物和探针浓度以及检测方法的反应条件进行优化.同时对其特异性、敏感性、重复性进行评估.结果显示,建立的RT-ddPCR方法最佳反转录体系为商品化一步法数字PCR试剂盒配套试剂、引物和探针终浓度分别为900 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度为57℃;用本方法检测常见疫病病毒时结果呈阴性;本方法最低检测限为3.2copies/μL,重复性好,且变异系数小于5%.采用RT-ddPCR和RT-qPCR对24份牛源拭子样品进行检测,检测结果显示所建方法优于RT-qPCR方法.本研究建立的RT-ddPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样品的核酸检测,为牛病毒性腹泻病毒感染的早期检测和定量诊断提供了技术支持.

分类号： S852.659.6

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