牛病毒性腹泻病毒一步法微滴数字PCR检测方法的建立与初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 叶京飞

作者： 叶京飞;郭利;刘占悝;李建友;李智杰;孙飞雁;董清平;程悦宁

作者机构：

关键词： 牛病毒性腹泻病毒;一步法;微滴式数字PCR;定量检测

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年 53 卷 001 期

页码： 1-8

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)一步法微滴数字PCR(RT-ddPCR)方法,本研究在一步法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法的基础上,设计BVDV的特异性引物和探针,对RT-ddPCR试验中的反转录酶、退火温度、引物和探针浓度以及检测方法的反应条件进行优化.同时对其特异性、敏感性、重复性进行评估.结果显示,建立的RT-ddPCR方法最佳反转录体系为商品化一步法数字PCR试剂盒配套试剂、引物和探针终浓度分别为900 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度为57℃;用本方法检测常见疫病病毒时结果呈阴性;本方法最低检测限为3.2copies/μL,重复性好,且变异系数小于5%.采用RT-ddPCR和RT-qPCR对24份牛源拭子样品进行检测,检测结果显示所建方法优于RT-qPCR方法.本研究建立的RT-ddPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样品的核酸检测,为牛病毒性腹泻病毒感染的早期检测和定量诊断提供了技术支持.

分类号： S852.659.6

  • 相关文献

[1]转基因抗除草剂大豆ZH10-6转化体特异性定量检测体系的建立. 白蓝,贾军伟,陈一帆,章寅,潘爱虎,吴潇. 2024

[2]快速检测牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR技术建立及应用. 郭锐,陈平,田永祥,杨克礼,刘泽文,段正赢,梁望旺. 2011

[3]SBPase基因超表达对烟草生长的影响. 韩平安,孙瑞芬,唐宽刚,常悦,梁亚晖,聂利珍,吴新荣,李晓东. 2021

[4]野生型非洲猪瘟病毒多重数字PCR方法的建立. 李松达,蒋亚君,庞忠宝,黄颖,翟文竹,朱鸿飞,赵晓民,贾红. 2024

[5]水貂阿留申病毒核酸标准物质的研制. 王春霞,商金源,吴顺,闫曼平,冯二凯,罗国良,易立,叶京飞,赵宗正,高华,程悦宁,王振军. 2024

[6]大豆转化体E8A7027外源T-DNA分析及特异性检测体系建立. 闫伟,马月,谢彦博,董立明,龙丽坤,李葱葱,张玲,李飞武. 2023

[7]转基因大豆'ZH 10-6'数字PCR精准定量检测方法的建立. 刘双,赵新,李瑞环,刘娜,兰青阔,檀建新,王永. 2021

[8]利用微滴式数字PCR技术分析转基因玉米抗除草剂标记基因EPSP拷贝数. 王犇,张春,李向龙,张中保,邹华文,吴忠义. 2017

[9]牛传染性鼻气管炎病毒微滴数字PCR检测方法的建立与初步应用. 吴顺,商金源,闫曼平,王春霞,冯二凯,易立,王振军,赵艳,郭利,程悦宁,罗国良. 2024

[10]改良一步法提取植物RNA·DNA和蛋白质的研究. 肖笑,韩斌,徐晟,李乐,何健,黄明,谢贵水,沈文飚. 2011

[11]一步法和两步法毛细管等电聚焦测定蛋白质和多肽等电点的比较. 高培峰,赵新颖,贺木易,刘庆生,屈锋. 2013

[12]简化一步多重RT-PCR法快速检测芜菁花叶病毒. 曾钢,叶艳英,闫晓红,马荣才,唐乐尘,姚磊. 2012

[13]改良一步法提取植物RNA、DNA和蛋白质的研究(英文). 肖笑,韩斌,徐晟,李乐,何健,黄明,谢贵水,沈文飚. 2010

[14]一步法TaqMan(R)探针实时荧光定量RT-PCR快速检测PRRSV的建立及初步应用. 路斌,袁秀芳,徐丽华,李军星,郭勇,王一成. 2012

[15]“一步法”诱导三角紫叶酢浆草再生体系的形成. 任杰,丁增成,刘祚军,唐菲,王艳,史丹. 2009

[16]mRNA差异显示技术中特异条带回收方法的比较. 李拥军,敖红,孙桂金. 2005

[17]一步法TaqMan~探针实时荧光定量RT-PCR快速检测PRRSV的建立及初步应用. 路斌,袁秀芳,徐丽华,李军星,郭勇,王一成. 2012

[18]一步法制备羧基聚苯乙烯共聚荧光微球及其表征. 刘清浩,郭金春,段鹏,刘红彦,陈立功. 2015

[19]一步法制备羧基聚苯乙烯共聚荧光微球及其表征. 刘清浩,郭金春,冷嘉鹏,段朋,刘红彦,陈立功. 2016

[20]一步法快速构建长片段RNAi发夹的载体. 刘廷利,郭冬姝,姚瑶,张保龙. 2021

作者其他论文 更多>>

微信小程序