鰤诺卡氏菌对大口黑鲈头肾巨噬细胞的侵染过程

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘文文

作者： 刘文文;邓玉婷;朱雪晴;赵飞;谭爱萍;王芳;张美超;黄志斌

作者机构：

关键词： 大口黑鲈;鰤诺卡氏菌;巨噬细胞;细胞凋亡

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2023 年 06 期

页码： 2602-2623

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】鱼类诺卡氏菌病潜伏期和病程较长，感染率和死亡率较高，给水产养殖业带来较大的经济损失，其病原鰤诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是胞内寄生菌，侵入细胞后引起慢性感染是主要的致病机制。【目的】构建鰤诺卡氏菌侵染大口黑鲈(Micropterus salmoides)头肾巨噬细胞体外模型，观察鰤诺卡氏菌侵染巨噬细胞的过程并探究鰤诺卡氏菌对巨噬细胞的凋亡作用。【方法】采用密度梯度离心法分离巨噬细胞，通过特异性染色和PCR扩增巨噬细胞表达基因mpeg1对细胞进行鉴定，并通过CCK-8法和氧呼吸暴发活性测定检测巨噬细胞的活性；通过倒置荧光显微镜和流式细胞术观察侵染过程中细菌与细胞的形态与数量变化；通过双荧光流式细胞术检测、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放试验及线粒体膜电位检测，探究鰤诺卡氏菌对巨噬细胞的凋亡作用。【结果】从大口黑鲈头肾分离获得纯度高的巨噬细胞，经染色和PCR法鉴定为巨噬细胞；筛选出最优的体外培养条件为1640培养基+1%青霉素链霉素+1%胎牛血清。在脂多糖刺激后，巨噬细胞的氧呼吸暴发能力显著提高(P<0.05)。GFP-鰤诺卡氏菌侵染细胞2 h后细菌被细胞吞噬，4 h细胞变圆且贴壁率降低，6h细菌大量繁殖并包围细胞，8h后细胞大量死亡。凋亡相关实验结果表明，侵染初期巨噬细胞凋亡率增加，LDH释放增加，线粒体膜电位下降；随着侵染时间延长，细胞凋亡率下降、LDH释放量及线粒体膜电位下降减少，说明鰤诺卡氏菌对巨噬细胞起先促进后抑制凋亡的作用。【结论】通过密度梯度离心法成功分离大口黑鲈头肾巨噬细胞，并通过鰤诺卡氏菌侵染细胞后初步摸清鰤诺卡细菌在细胞水平的致病机理，建立了鰤诺卡氏菌侵染大口黑鲈头肾巨噬细胞的体外模型；证实了鰤诺卡氏菌可侵染巨噬细胞并抑制细胞凋亡，从而达到在巨噬细胞内存活，为进一步开展鰤诺卡氏菌与巨噬细胞相互作用并阐明鰤诺卡氏菌的致病机制奠定了研究基础。

分类号： S943

  • 相关文献

[1]大口黑鲈MsIL-21基因的克隆、表达及其对细菌感染的应答特征. 朱雪晴,赵飞,邓玉婷,谭爱萍,赖迎迢,巩华,黄志斌,荆鹏华. 2023

[2]鰤诺卡氏菌灭活疫苗对大口黑鲈非特异性免疫指标的影响. 杨星,张美彦,张效平,赵振新,商宝娣,周勇. 2023

[3]革胡子鲶的鰤诺卡氏菌感染. 王芳,常藕琴,颜远义,姜兰,刘春,李凯彬. 2017

[4]9株鱼源鰤诺卡氏菌生物学特征和致病性比较. 罗愿,邓玉婷,赵飞,谭爱萍,张美超,姜兰. 2021

[5]乌鳢IL-1RAcP的分子特征及其对两种病原菌感染的免疫应答. 李冬琦,崔正伟,赵飞,邓玉婷,谭爱萍,黄志斌,姜兰. 2022

[6]一株鳢源鰤诺卡氏菌致病性与全基因组分析. 张美超,邓玉婷,赵飞,谭爱萍,罗愿,李东铭,姜兰,黄志斌. 2022

[7]不同分子量段蛹虫草多糖的超滤分离及其对巨噬细胞释放NO的影响. 朱丽娜,周帅,刘艳芳,杨焱,王世平,王兆龙,唐庆九. 2011

[8]灰树花多糖GFP75-2-2B的分离及其对刺激巨噬细胞释放NO的影响. 乔彦茹,罗永煌,周帅,杨焱,贾薇,唐庆九,刘艳芳,张劲松,周昌艳. 2010

[9]GF—复合中草药添加剂对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响. 胡明,陈爱素,常建华,宋爱君. 1993

[10]猴头菌细胞壁多糖的提取和其结构特征. 唐川,吴迪,杨焱,李巧珍,刘艳芳,周帅,颜梦秋. 2016

[11]不同产地毛头鬼伞子实体多糖特征及其刺激巨噬细胞产生NO的活性. 赵源,刘艳芳,蒋俊,杨焱,唐庆九,周帅,吴迪,贾薇,冯娜,张劲松. 2011

[12]高分子量灰树花多糖GFLP的分离纯化及其对免疫细胞的作用. 周昌艳,吴爱忠,唐庆九,刘艳芳,周帅,贾薇,杨焱,严陪兰. 2013

[13]超声降解对猴头菌多糖的理化性质及体外免疫活性的影响. 李彩金,杨焱,吴迪,刘艳芳,李巧珍,汪雯翰,吴艳,张劲松,张赫男. 2017

[14]鲍姆纤孔菌菌丝三萜对小鼠巨噬细胞免疫调节活性的影响. 马晓颖,吕立涛,杨涛,姚澜,李长田,肖军. 2021

[15]基于MeDIP-seq研究蛋氨酸对巨噬细胞炎症中甲基化水平的影响. 徐翌斌,罗成龙,瞿浩,计坚,舒鼎铭. 2021

[16]烟酰胺腺嘌呤二核苷酸代谢介导动物肠道免疫功能机理的研究进展. 甄锐,黄艳娜,蒋宗勇,易宏波. 2021

[17]金针菇子实体多糖FVPB1对小鼠T细胞和巨噬细胞的免疫调节作用. 刘肖肖,汪雯翰,冯婷,张劲松,吴莹莹,杨焱,刘艳芳,贾薇. 2019

[18]乳酸杆菌可增强抗绿脓杆菌感染. 刘星. 1984

[19]灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物抑制脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7产生NO的活性. 张忠,刘艳芳,唐庆九,周帅,杨焱,颜梦秋,唐传红,吴迪,冯娜,张劲松. 2018

[20]松针多糖对鸡巨噬细胞HD11的天然免疫调节. 崔小珍,栾艳,李婷婷,杨裕,关文超,张凯,王福传,宋献艺. 2020

作者其他论文 更多>>

微信小程序